Resumo

A lacase é uma enzima designada como uma cuproproteína que possui a capacidade de oxidar substâncias fenólicas doando seus elétrons para o oxigênio molecular. Sua aplicação como biocatalizador industrial é ampla, podendo ser utilizada no tratamento de efluentes contaminados com resíduos industriais. Apesar de ser produzida por insetos, fungos, plantas e bactérias, somente a enzima fúngica é usada, atualmente, em aplicações biotecnológicas. No entanto, a produção pelas bactérias apresenta maior estabilidade e produção mais rápida em relação ao ciclo de crescimento. Assim, o presente trabalho teve como objetivo isolar cepas bacterianas, provenientes de madeira em decomposição, que sejam produtoras de lacase que na natureza está envolvida no processo de degradação de materiais ligninocelulósicos. As cepas foram isoladas de 16 amostras de madeira em decomposição obtidas de áreas fragmentadas da Universidade Federal do Amazonas (UFAM) e do Instituto Nacional de Pesquisas da Amazônia (INPA). Um grama da biomassa foi submetido a quatro séries de técnicas de diluições sucessivas de 1:10, as quais foram semeadas em placas de Petri contendo meio Ágar Nutriente Simples e Ágar Amido Caseína seletivo para Actnomicetos. Seu crescimento foi observado a cada 24 horas e após 72 horas, as amostras foram purificadas por meio da técnica de estrias de desgaste e posteriormente submetidas à identificação macro e micromorfólogica.Trinta e nove bactérias foram isoladas, sendo 12 cepas crescidas em meio Ágar Amido Caseína e 27 em meio Ágar Nutriente Simples. Foram submetidas a ensaios enzimáticos depois de 72 horas de crescimento, e após este período foram transferidas para meio líquido acrescido de sulfato de cobre e ácido tânico como indutor. A atividade de lacase foi determinada pela oxidação de dois substratos: o ABTS ou ácido 2,2'-azino-bis(3-etilbenzotiazolin-6-sulfonico) e Orto-dianisidina, em uma mistura de reação (1 mL) contendo extrato enzimático, tampão acetato de sódio e o substrato. Na leitura da reação com o substrato ABTS, somente nove cepas das amostras apresentaram atividade enzimática, enquanto que na análise com o substrato Orto-Dianisidina, 30 isolados tiveram atividade enzimática detectada. Assim, grande parte dos isolados apresentaram atividade de lacase, no entanto a determinação utilizando-se o substrato Orto-Dianisidina obteve maior atividade entre as amostras.