Resumo

Membros do gênero Shigella estão entre os agentes mais importantes de enterite aguda, quadro associado a taxas elevadas de morbidade e mortalidade, principalmente entre crianças de países menos desenvolvidos. Bacteriocinas são proteínas ou peptídeos antimicrobianos sintetizados por diversas bactérias, inclusive Shigella. Considerando a baixa dose infectante do organismo, é plausível supor que bacteriocinas atuem como fatores de virulência, conferindo vantagem para a bactéria. Frente à importância e à escassez de dados relativos ao tema, desenvolvemos este estudo com o objetivo de extrair, purificar e caracterizar uma bacteriocina produzida por uma amostra de Shigella sonnei isolada de espécime fecal de criança com diarreia aguda. A amostra, sabidamente produtora de substância antagonista, foi submetida a extração proteica por meio de precipitação por sulfato de amônio. A fração intracelular precipitada à concentração de 75% do sal (C75) foi selecionada para estudos de caracterização que incluíram avaliação da estabilidade a temperaturas, pHs, solventes orgânicos e enzimas proteolíticas, além de SDS-PAGE, para estimativa da massa molecular da bacteriocina por meio de revelação in situ. A fração foi encaminhada para etapas sequenciais de cromatografia para purificação da bacteriocina que, então, foi submetida a espectrometria de massa. A atividade de C75 foi mantida após tratamento com ampla faixa de pH. Temperaturas elevadas e enzimas proteolíticas inativaram a substância, sugerindo a natureza proteica da mesma. Não houve perda significativa de atividade do extrato após tratamento com solventes orgânicos, indicando que a atividade biológica não é dependente de lipídio ou carboidrato eventualmente complexado à proteína. O resultado de SDS-PAGE de C75 demonstrou atividade de duas bandas com massas moleculares na faixa de 52-72kDa e a espectrometria de massa da fração parcialmente purificada revelou apenas moléculas com massa de até cerca de 2kDa. Tal fato sugere que a amostra de S. sonnei expresse tanto colicina(s) como microcina(s) ou, alternativamente, que a(s) substância(s) antagonista(s) de massa(s) molecular(es) baixa(s) esteja(m) complexada(s) com outras moléculas no extrato bruto, elevando a massa molecular aparente. É possível, ainda, que as bacteriocinas de massas moleculares superiores a 50kDa não tenham sido detectadas na espectrometria de massa por estarem bloqueadas ou acetiladas. Instituições de fomento: CNPq, FAPEMIG, CAPES, PRPq/UFMG e TWAS