Resumo

Reservatórios de petróleo são ambientes únicos por apresentarem uma combinação de condições ambientais extremas no que se refere à temperatura, pressão e salinidade. Uma grande variedade de espécies de bactérias tem sido isolada deste ambiente, dentre as quais destacamos as do gênero Petrotoga, que apresentam uma toga característica e são termofílicas e halofílicas. Em projeto realizado por nosso grupo em parceria com a PETROBRAS, amostras de fluidos de poços de produção de petróleo de um reservatório da região Nordeste foram cultivadas e analisadas quanto à presença de bactérias fermentativas e redutoras de sulfato, dentre outros grupos. Espécies do gênero Petrotoga foram identificadas por análises moleculares e provavelmente recuperadas nos cultivos em meios enriquecidos, onde se observaram morfotipos com a presença de toga. Nesse contexto, o presente trabalho teve como objetivo isolar estes morfotipos por meio de cultivos anaeróbios, e identificá-los a partir de análises moleculares. Alíquotas dos fluidos foram inicialmente inoculadas nos meios BANHT e Postgate e, a partir da verificação da presença dos morfotipos com toga por microscopia, testaram-se dois meios líquidos para esse isolamento - meio P.mexicana e meio P.olearia. Em todos os cultivos os meios tiveram a salinidade ajustada para 7% de NaCl e foram incubados a 60^oC. Do crescimento obtido nos meios testados procedeu-se ao isolamento em meios sólidos. A identificação de um dos isolados – MG02 – e das bactérias presentes no cultivo em meio líquido P.olearia foi feita tendo como alvo o gene do DNAr16S. O DNA total obtido dos isolados foi amplificado por PCR utilizando-se o par de primers B27f e U1492r. As reações de seqüenciamento foram feitas usando-se os primers universais M13f e M13r e foram aplicadas em um sequenciador automático. As sequências obtidas foram analisadas quanto à qualidade no programa CromasPro e submetidas a um banco de dados utilizando o programa BLAST para uma análise preliminar de identificação do microrganismo mais semelhante. Os 15 clones analisados mostraram identidade de 98% a 100% com Petrotoga mobilis, Petrotoga miotherma, Petrotoga halophila e Petrotoga olearia. O projeto prosseguirá com testes de crescimento dessas espécies em substratos como xilanas e dextranas, por exemplo, com intuito de melhor analisar suas possíveis aplicações biotecnológicas.