Resumo

Atualmente tem sido investigado o potencial das proteases fibrinolítica de origem fugicas no tratamento da Trombose, que é considerada uma das consequências das Doenças Cardiovasculares, que na atualidade é um dos maiores flagelos da vida moderna. Dessa forma, neste estudo avaliou-se a produção de proteases de cinquenta culturas de fungos filamentosos pertencentes aos gêneros: Aspergillus spp., Fusarium spp., Paecilomyces spp., Penicillium spp. e Trichoderma spp., mantidas em água destilada esterilizada na Coleção de Fungos da Amazônia-CFAM/FIOCRUZ-Amazônia. As culturas foram reativadas em meio Ágar Sabouraud (SAB) e incubadas a 28⁰C durante sete dias. Para a obtenção do extrato enzimático as culturas foram submetidas à fermentação em Solução de Manachini suplementada com gelatina a 5%, mantidas a 120rpm por 96 horas a 28⁰C. Os extratos enzimáticos foram separados da massa micelial por filtração a vácuo. Os extratos enzimáticos foram avaliados qualitativamente em meio sólido Ágar gelatina a 5% suplementado com leite desnatado a 5%, onde foram feitos “cup plate” em triplicata, com diâmetro de 1 cm cada, onde a produção enzimática foi avaliada pela formação de halos em mm. A análise enzimática quantitativa foi determinada através da mistura da reação contendo 1,5ml de solução a 2% de caseína, 1 ml de tampão fosfato e 0,5ml da solução enzimática e paralisada pela adição de 3ml de ácido tricloroacético, determinada no espectrofotômetro a 260nm. Coágulos de ovinos do Centro de Criação de Animais de Laboratório - CECAL/FIOCRUZ foram imersos em extratos enzimáticos positivos para análise da ação fibrinolítica, verificado a cada 24 horas por 72 horas. Dos 50 fungos filamentosos analisados qualitativamente, 25 (50%) apresentaram positividade para proteases. Os halos apresentaram diâmetro médio variando de 1,33mm a 12,67mm. O rastreio quantitativo apresentaram uma gama variação da atividade proteolítica de 29,73 U/mL a 2,33 U/mL nos ensaios realizados, o gênero Penicillium spp destaca-se como um dos maiores produtores. Dos extratos analisados (25) quanto à ação fibrinolítica 4% diluíram totalmente o coágulo em 24h, em 48h 20%, em 72h 40% e 36% não diluíram totalmente o coágulo ao término das 72h. Os resultados obtidos demonstram o grau de especificidade desses fungos para produção de proteases com ação fibrinolítica