Resumo

El telurito es tóxico para la mayoría de las bacterianas Gram negativo. Entre los daños destacan la disminución intracelular de glutatión, la carbonilación y desmantelamiento de centros [Fe-S] en proteínas y un aumento de especies reactivas de oxígeno (ROS), particularmente superóxido (O₂^.-), desencadenando de este modo un estrés de tipo oxidativo. Diversos mecanismos de resistencia a telurito han sido planteados como i) la expulsión hacia el exterior de la célula; ii) su conversión a derivados metilados volátiles y iii) la reducción a su forma elemental Te⁰, menos tóxica. El telurito puede ser reducido por biomoléculas como glutatión o cisteína y por enzimas “telurito reductasas” (TR) dependientes de NAD(P)H, como catalasas y el componente E3 de los complejos piruvato deshidrogenasa y α-cetoglutarato deshidrogenasa de E. coli. Además se ha descrito la reducción del tóxico por parte de ciertas oxidasas terminales de la Cadena Transportadora de Electrones (CTE) de Bacillus selenitireducens, Sulfurospirillum barnesi, Pseudomona aerouginosa y E. coli y otras oxidasas como las nitrato reductasas, provocando la acumulación de depósitos negros intracelulares. En E. coli, la CTE posee los componentes NADH deshidrogenasa I (NDH-I), NADH deshidrogenasa II (NDH-II) y tres citocromo oxidasas en condiciones aeróbicas. La CTE reduce el oxígeno molecular a agua a expensas de los electrones obtenidos en la oxidación del NADH por las deshidrogenasas. En este trabajo se ensayó fracciones de membrana de E. coli silvestre y las mutantes NDH-I^- y NDH-II^-, previamente expuestas a telurito, determinándose las actividades TR, NADH deshidrogenasa, duroquinol oxidasa así como generación de superóxido. La enzima NDH-II fue sobreexpresada y purificada previo a los ensayos de actividad TR utilizando NADPH, NADH y d-NADH; como inhibidor de la actividad citocromo oxidasa se usó KCN. Los resultados mostraron que en membranas existe actividad TR dependiente de NADH, la que aumenta en presencia de KCN. Utilizando d-NADH, sustrato específico de NDH-I, no existe reducción. Ensayos con la enzima NDH-II purificada la identificaron como una nueva telurito reductasa dependiente de NADH. Financiamiento: FONDECYT 1090097, DICYT USACH y Becas Apoyo Tesis Doctoral 24121087 y VRID.