Resumo

Rizóbios são bactérias gram negativas de vida livre no solo e, quando em simbiose com determinadas leguminosas são capazes de fixar biologicamente o nitrogênio atmosférico (FBN) e convertê-lo a uma forma assimilável. O feijoeiro (Phaseolus vulgaris L.) representa uma importante fonte de proteínas para o consumo humano. Essa leguminosa tem sido relatada como altamente promíscua em nodular com uma diversidade de estirpes de rizóbios do solo. O gene 16S rRNA tem sido amplamente utilizado na identificação e classificação de micro-organismos procariotos, no entanto, este marcador não separa algumas espécie muito próximas. O MLSA (“multi locus sequencing analysis”) é uma ferramenta auxiliar na análise polifásica juntamente com o 16S, representando uma estratégia útil para o agrupamento bacteriano. O objetivo deste trabalho foi sequenciar três genes após previa identificação através da análise de sequência do gene 16S rRNA, de estirpes isoladas de nódulos de feijoeiro. Para o sequenciamento dos genes gltA, recA e rpoA foram utilizadas seis estirpes de quatro gêneros diferentes, Rhizobium sp., Stenotrophomonas maltophilia, Burkholderia cepacia e Herbaspirillum lusitanum. Essas estirpes são representantes de um grupo de 17 estirpes efetivas na FBN que foram selecionadas com base no sequenciamento do gene 16S rRNA. Os produtos amplificados com os oligonucleotídeos para os genes de interesse (gltA, recA e rpoA) foram purificados e utilizados na reação de sequenciamento. As sequências foram avaliadas no programa BioEdit, alinhadas no ClustalX e a análise filogenética realizada no programa MEGA com algoritmo neighbor-joining. Para a identificação das estirpes as sequências foram comparadas no banco de dados público NCBI (http://www.ncbi.nlm.nih.gov). Na construção da árvore filogenética concatenada dos genes gltA, recA e rpoA foram formandos dois grupos distintos. As estirpes IPR-Pv615, -2608 e -3085 ficaram agrupadas com o gênero Rhizobium sp. e Agrobacterium sp. O método do MLSA concatenado permitiu agrupamento das estirpes de rizóbios diferenciado do obtido apenas com o gene 16S rRNA.