Resumo

Para o desenvolvimento de um processo enzimático eficiente deve-se estabelecer uma estratégia de purificação. De um modo geral, a purificação de queratinases toma como base as técnicas utilizadas nas proteases alcalinas, porém, o alto custo representado por estas técnicas se torna uma barreira para obtenção destes bioprodutos. Assim, o sistema aquoso bifásico (SAB) pode ser uma alternativa adequada destinada ao primeiro passo de purificação, visto que remove vários contaminantes em um processo simples e econômico. O SAB explora a capacidade exibida por soluções de dois polímeros ou de um polímero e um sal de se separarem em duas fases aquosas sempre que certas concentrações mínimas sejam excedidas. O objetivo do presente estudo foi purificar a queratinase produzida por Aspergillus sulphureus URM5029 utilizando o sistema aquoso bifásico. Para a extração da queratinase do meio de fermentação, os parâmetros estudados foram: massa molar e concentração do PEG e concentração do citrato de sódio. Os sistemas foram preparados com PEG de diferentes massas molares (400, 3350 e 8000 g/mol) e sal citrato de sódio. Os estudos de extração foram baseados em planejamento experimental. Para análise estatística dos resultados foram utilizadas três variáveis respostas: aumento de pureza, coeficiente de partição e recuperação queratinolítica. A melhor condição final de extração foi definida como aquela que proporcionou a melhor combinação entre as respostas. Após a realização dos experimentos foi feita a análise estatística dos resultados, com o auxílio do software Statistica 7.0. Os melhores resultados de purificação da queratinase após análise estatística dos efeitos da concentração de PEG, massa do PEG e concentração do citrato foram obtidos na fase topo, ou seja, fase onde se encontra o polietileno glicol (PEG), também de acordo com essa análise foi possível observar que quanto maior a massa e concentração do PEG e quanto menor a concentração de citrato maior será o aumento de pureza e a recuperação da queratinase extraída do meio de fermentação. As melhores condições para purificação da queratinase de Aspergillus sulphureus URM5029 foram: massa molecular do PEG, 8000; concentração do PEG, 20% e concentração de citrato 15%, apresentando aumento de pureza e recuperação queratinolítica de 25,04 e 184,9%, respectivamente.