Resumo

Elementos genéticos extracromosómicos del tipo RNA de doble hebra (dsRNA) son comúnmente encontrados en hongos filamentosos y levaduras. En distintas cepas de la levadura Xanthoplyllomyces dendrorhous estos elementos son altamente variables en cuanto a número y secuencia. Según su tamaño se han clasificado como L1-, L2-, M-, S1- y S2-dsRNA de 5.0, 3.7, 1.4, 0.9 y 0.8 Kb, respectivamente. Recientemente se secuenciaron los dsRNAs presentes en la cepa UCD 67-385 de X. dendrorhous, identificando tres Totivirus denominados XdV-L1A, XdV-L1B y XdV-L2, capaces de co-existir en una misma célula. Aunque en cepas portadoras de dsRNAs se ha reportado la existencia de partículas tipo virus (VLPs), no hay antecedentes acerca de la encapsidación diferencial de los dsRNAs que existen en la levadura. En el presente trabajo se realizó la caracterización de las VLPs en distintas cepas de X. dendrorhous. Muestras de VLPs fueron obtenidas desde cultivos de cada cepa para ser analizados por microscopía electrónica de transmisión, y la encapsidación de los dsRNAs fue determinada por medio de ensayos de protección a RNAsa A. Las VLPs fueron separadas por ultracentrifugación en gradiente de sacarosa y cada fracción obtenida fue caracterizada en cuanto a su contenido de dsRNAs y proteínas estructurales (SDS-PAGE). De acuerdo con los resultados obtenidos de protección a RNasa A, todos los dsRNAs en las distintas cepas son encapsidados en partículas virales. En el análisis por microscopía electrónica se observaron partículas esferoidales de 30-38 nm de diámetro. De acuerdo a los perfiles de dsRNAs obtenidos desde las fracciones de VLPs, existirían partículas con distinto contenido de dsRNAs, algunas de las cuales contienen un sólo tipo de dsRNA, mientras que otras portan más de uno. Los resultados del contenido proteico y los dsRNAs presentes en cada fracción de las distintas cepas, sugiere la existencia de una proteína de 76 kDa que sería codificada por L1-dsRNA y una proteína de 37 kDa por L2-dsRNA. De acuerdo a su tamaño, ambas corresponderían a la proteína de la cápside de las respectivas VLPs. Con estos resultados se puede concluir que en cepas de X. dendrorhous existen dos tipos de partículas independientes y estructuralmente distintas, responsables de encapsidar a sus respectivos genomas virales y a los múltiples dsRNAs presentes. La co-existencia de distintos virus y la encapsidacion diferencial de los dsRNAs es un fenómeno muy inusual en micovirus de levaduras, convirtiendo a X. dendrorhous en un buen modelo para el estudio de sistemas virales y su interacción con el hospedero.