Resumo

As interações microbianas que ocorrem no filoplano são pouco exploradas, sendo os trabalhos praticamente inexistentes no que se refere a interações entre leveduras saprofíticas e amebas. Neste caso, são focados em leveduras patogênicas humanas (ex. Cryptococcus neoformans e Trichosporon asahii) e amebas como modelo da interação com macrófagos. Esses trabalhos tentam elucidar o mecanismo de patogenicidade através da presença de polissacarídeos extracelulares quando elas já passaram do estágio saprofítico para patogênica, isto é, nenhum deles aborda o papel da cápsula no seu próprio nicho (filoplano), tampouco papel na fagocitose por seus predadores naturais. O objetivo do presente trabalho é estudar o papel dos polissacarídeos extracelulares de leveduras saprofíticas isoladas do filoplano de bromélias na interação com Acanthamoeba castellanii. Foram selecionadas quatro leveduras de acordo com o tamanho da cápsula polissacarídica em meio de cultura não indutor através de coloração negativa com tinta nanquim. Após a seleção, as leveduras foram cultivadas em meio quimicamente definido por quatro dias a 28ºC. Os polissacarídeos extracelulares foram purificados e a composição analisada por cromatografia gasosa/espectrometria de massa (GC/MS). Todas as amostras são compostas principalmente de xilose e manose com uma quantidade considerável de ácido glicurônico e galactose, e quantidades variáveis de glicose. Os isolados BI96 e BI276 apresentam uma pequena quantidade de N-acetilglucosamina. A quantidade de carboidratos foi maior que 90% para os quatro isolados analisados. As análises de GC-MS revelaram a presença de carboidratos que fazem parte do polissacarídeo majoritário de C. neoformans glicuronoxilomanana (GXM). Sendo assim, foi realizada imunofluorescência com o mAb18B7 anti-GXM de C. neoformans. Somente as estruturas capsulares de BI276 foram reconhecidas, sugerindo a presença comum de epítopos capsulares. Para os ensaios de fagocitose foram utilizadas células de A. castellanii Neff (ATCC30010) e A. castellanii T4 (ATCC50492). Os índices fagocíticos de A. castellanii Neff para os quatro isolados foram 38% para BI96, 31% para BI169, 5% para BI276 e 3% para BI279. Para A. castellanii T4 os índices fagocíticos foram: 26% para BI96, 15% para BI169, 10% para BI276 e 38% para BI279. Os ensaios indicaram que todos os isolados foram fagocitados pelas amebas, mas apresentaram resultados diferentes de acordo com o isolado de A. castellanii. Estes resultados estão de acordo com a literatura para C. neoformans. Em etapas futuras, também avaliaremos a taxa de morte das células de leveduras e de amebas, além de testes de fagocitose com isolados de amebas obtidos a partir do mesmo substrato. Fomento: CNPq e CAPES.