Resumo

Bactérias do gênero Bacillus são conhecidas pela eficiência em práticas de controle biológico de pragas, especialmente nas áreas de saúde pública e agricultura. Nesse contexto, Bacillus thuringiensis é a principal espécie alvo de pesquisas nesses setores. Essa bactéria produz diferentes proteínas tóxicas, formando cristais, os quais podem ser compostos por uma ou várias proteínas Cry, que são altamente específicas para diferentes pragas-alvo. No contexto pragas, algumas espécies de fitonematóides causam grandes perdas econômicas em leguminosas, gramíneas e frutíferas. Sendo assim, o objetivo desse trabalho foi determinar o perfil protéico e a morfologia do cristal da cepa de B. thuringiensis Bt 1886-2, que apresentou atividade tóxica aos fitonematóides do gênero Meloidogyne. A cepa, proveniente do Laboratório de Microbiologia e Toxicologia da Unisinos, foi crescida em meio usual glicosado (48h e 28ºC) e centrifugada, sendo o sedimento bacteriano acondicionado a -18ºC. O sedimento foi então usado para extração de DNA, análise do conteúdo proteíco e análise ultra-estrutural. A amostra de DNA extraída foi submetida a uma reação em cadeia da polimerase (PCR) para análise do contéudo de genes cry, utilizando oligonucleotídeos para o gene cry 14, e o extrato protéico por SDS-PAGE (10%) para verificar o perfil das proteínas Cry em estudo. Para a análise ultra-estrutural da amostra foi utilizado o microscópio eletrônico de varredura (MEV) Jeol JSM 7001F a 10Kva. O perfil proteico do sedimento da cepa Bt 1886-2 mostrou a presença de uma banda majoritária 97kDa, além de polipeptídeos de 49 e 66 kDa. Já a PCR, amplificou um fragmento de 500 pares de bases, que correspondente ao tamanho esperado para o gene cry 14, cuja literatura descreve como codificador de uma proteína com atividade nematicida. Nos dados ultra-estruturais, foi possível detectar a presença de um cristal no sedimento bacteriano com a forma bipiramidal, como na maioria das cepas de B. thuringiensis avaliadas nas pesquisas de controle microbiano de pragas e doenças.