Resumo

Recentemente foi demonstrada a presença de RNA-metilases indutíveis, podendo tornar ineficaz o uso de macrolídeos no tratamento de infecções causadas por micobactérias de crescimento rápido. O tempo usual para leitura dos testes de susceptibilidade é de 72 h, não permitindo a detecção deste mecanismo de resistência, o que pode explicar a ocorrência de falha terapêutica a despeito da sensibilidade in vitro nos testes convencionais. Dezoito isolados de M. abscessus subsp. bolletii epidemiologicamente não relacionadas e 18 isolados de M. abscessus subsp. abscessus foram cultivados em ágar sangue de carneiro por 5 dias a 30°C. Após, o DNA foi extraído por lise térmica e um fragmento de aproximadamente 570 pb de erm foi amplificado para M. abscessus subsp. abscessus e 340 pb para M. abscessus subsp. bolletii, devido a uma deleção neste gene. Para a reação de PCR foram utilizados primers erm41-rpsA-5L 5’CTTTGGAGCATGGGCATATT e erm41-coaE-3L 5’GTTAGGCCGATACGCAACAT e Phusion® DNA polymerase, sendo submetida a um ciclo térmico de 98°C por 30s; 35 ciclos de 98°C por 10s, 66°C por 20s, 72°C por 30s; e uma extensão final a 72°C por 7 min. As produtos de PCR foram purificados com GFX kit e sequenciados usando BigDye® Terminator Cycle Sequencing kit de acordo com instruções do fabricante. Contigs foram montados, sequências de nucleotídeos foram traduzidas e alinhadas usando o programa BioEdit. Todos os isolados eram sensíveis à claritromicina após 72 h, porém, quando reincubados por 14 dias, apresentaram resistência indutível a este antimicrobiano. As sequências de aminoácidos dos isolados foram comparados com 6 sequências distintas de aminoácidos do gene erm41 depositadas no GenBank, onde observamos em um isolado de M. abscessus subsp. abscessus (F2523) duas mutações W10R e I80V e em outro isolado (F1326) a mutação I80V. Estes isolados foram 100% similares com duas sequências distintas depositadas no GenBank, porém contendo a mesma nomenclatura erm41. É importante a incubação estendida por 14 dias de testes de susceptibilidade para claritromicina para avaliação de RNA metilase indutível. Também propomos uma nova nomenclatura para estes genes, como erm45 e erm46.