XXI ALAM
Resumo:340-1


Poster (Painel)
340-1ESTUDO DA INTERAÇÃO DE PROVÁVEIS LIPOPROTEÍNAS DE MEMBRANA EXTERNA DE Leptospira COM PROTEÍNAS DO HOSPEDEIRO
Autores:Demetria Luci Fazolo (IBU - INSTITUTO BUTANTAN) ; Denize Monaris (IBU - INSTITUTO BUTANTAN) ; Cecília Mari Abe (IBU - INSTITUTO BUTANTAN) ; Zenaide Maria Moraes (USP - UNIVERSIDADE DE SÃO PAULO) ; Silvio Arruda Vasconcellos (USP - UNIVERSIDADE DE SÃO PAULO) ; Angela Silva Barbosa (IBU - INSTITUTO BUTANTAN) ; Patricia Antonia Estima Abreu de Aniz (IBU - INSTITUTO BUTANTAN)

Resumo

Introdução: A leptospirose é uma das principais zoonoses do mundo, causada por espiroquetas patogênicas do gênero Leptospira, que acometem animais domésticos, silvestres e o homem. As análises computacionais das sequências dos genomas de leptospiras têm contribuído para a identificação de um grande número genes que codificam prováveis lipoproteínas de membrana. Esta diversidade sugere que muitas funções celulares podem ser dependentes de lipoproteínas, como formação e estabilização da parede celular, interação bactéria-hospedeiro, transporte de substratos, virulência, entre outras. A identificação destas proteínas é essencial para o entendimento da patogênese da leptospirose e no desenvolvimento de vacinas e ensaios diagnósticos. Objetivo: Avaliar a interação de seis prováveis lipoproteínas de membrana externa de Leptospira com diferentes moléculas do hospedeiro (colágeno IV, laminina, fibronectina plasmática, fibronectina celular, plasminogênio, fibrinogênio e elastina). Materiais e Métodos: As proteínas recombinantes foram purificadas por cromatografia de afinidade a níquel e avaliadas por gel SDS-PAGE. Camundongos Balb/c foram imunizados com cada proteína recombinante purificada na presença de hidróxido de alumínio como adjuvante. Os soros policlonais produzidos foram utilizados em ensaios de interação das proteínas recombinantes com proteínas do hospedeiro por ELISA. Resultados e Discussão: As proteínas recombinantes Lp21 e Lp22 foram purificadas a partir da fração solúvel e as Lp30 e Lp35 da fração insolúvel obtidas de lisados totais induzidos de E.coli. Cada proteína recombinante purificada apresentou uma banda majoritária com peso molecular esperado. Foram obtidos altos títulos de anticorpos policlonais produzidos em camundongos Balb/c. Experimentos de adesão demonstraram forte interação da Lp21 e Lp30 com laminina, fibronectina plasmática e plasminogênio; Lp22 demonstrou forte interação com colágeno IV, laminina, fibronectina plasmática, plasminogênio, fibrinogênio e elastina; das proteínas testadas, nenhuma interagiu com fibronectina celular. Estes resultados indicam que estas proteínas podem mediar às interações com o hospedeiro, como adesão, disseminação e colonização.


Palavras-chave:  LEPTOSPIRA, LEPTOSPIROSE, LIPOPROTEÍNAS, MATRIZ EXTRA CELULAR