Resumo

A avaliação de contaminação microbiana é um importante mecanismo de controle e prevenção do crescimento de microrganismos em armazenamento de combustíveis. A partir do monitoramento da contaminação a adoção de medidas de controle destas populações, como drenagem do tanque de armazenagem ou até mesmo a utilização de biocidas, pode ser utilizada para manutenção da qualidade do combustível. O objetivo deste trabalho foi analisar características bioquímicas das bactérias isoladas de laminocultivos, utilizados para avaliação da contaminação microbiana, em mistura B10 em microcosmo montado em laboratório. O microcosmo continha 20 mL de fase aquosa (Bushnnel- Hass) e 60 mL de fase oleosa (óleo diesel B10 – 90% de óleo diesel S50 contendo 10% de biodiesel de soja). Foram avaliados dois cenários de contaminação, sendo um da mistura B10 como recebido, na condição de média contaminação e o outro a aplicação de um inóculo microbiano de 106 UFC/mL proveniente de borra biológica de tanque de armazenamento, segundo norma ASTM E1259-10. O monitoramento da contaminação foi realizado durante 0, 14, 28, 42 e 60 dias pelos laminocultivo que eram imersos na fase aquosa e oleosa presente no microcosmo. Nos laminocultivos foram selecionadas as colônias que apresentavam morfologias distintas. Estas foram submetidas à avaliação em placa quanto à produção de biossurfactantes ramnolipídeos (meio azul de metileno) e de lipase (meio rhodamina B e tributirina), e incubação em meio cetrimide. Para a fase aquosa a contaminação nos dois tratamentos foi entre 105 e 106UFC/mL. Foram isoladas 14 bactérias do tempo 0 ao tempo 60 dias no tratamento como recebido, sendo destas 6 (14) positivas para lipase em meio rhodamina B e 2 (14) em meio tributirina; 12 (14) cresceram em meio cetrimide meio seletivo de bactérias do gênero Pseudomonas, frequentemente citado como contaminante de combustíveis; 5 (14) cresceram em meio para detecção de ramnolipídeos. O tratamento contaminado teve 11 bactérias isoladas do tempo 0 ao tempo 60 dias, sendo destas 5 (11) positivas para lipase e 4 (11) em meio tributirina; 6 (11) cresceram em meio cetrimide; 3 (11) cresceram em meio para detecção de ramnolipídeos. Pretende-se proceder a extração de DNA do isolados e caracterizá-los por sequenciamento da região 16S rRNA, e comparação das sequências obtidas com as depositadas no BLAST. Também pretende-se relacionar a presença de microrganismos essenciais a degradação de B10 em amostras cultiváveis em laminocultivos e não-cultiváveis, assegurando-se a detecção destes em amostras de combustíveis como determinantes para a avaliação da contaminação do combustível e posterior tomada de ações que visem o controle destes microrganismos.