Resumo

El telurito es tóxico para la mayoría de los organismos dada su capacidad para generar estrés oxidativo. En E. coli expuesta al tóxico se observó un aumento de especies reactivas de oxígeno, una disminución de la actividad α-cetoglutarato deshidrogenasa (KGDH) y acumulación de α-cetoglutarato (KG). Este último, actúa como antioxidante y puede descarboxilarse no enzimáticamente en presencia de peróxido de hidrógeno generando dióxido de carbono, agua y succinato. Se sugirió que una de las principales enzimas involucradas en la síntesis de KG, isocitrato deshidrogenasa, podría aumentar su actividad en E. coli expuesta a telurito. Sin embargo, esta actividad disminuyó. En este trabajo se trató de dilucidar el rol de otra enzima del metabolismo del α-cetoglutarato, glutamato deshidrogenasa (GDH), que cataliza la des-aminación oxidativa de glutamato para formar reversiblemente KG. Se propone que E. coli expuesta a telurito experimentaría un aumento de esta actividad y/o podría aumentar la síntesis de transcritos del gen gdhA. Por otro lado, en cepas ΔgdhA podría variar el contenido de KG y la generación de especies reactivas de oxígeno (ROS). E. coli (silvestre y ΔgdhA) fueron crecidas en medio LB y se trataron con telurito (0,5 μg/ml) a una DO600 ~0,5. Los controles correspondieron a las cepas no tratadas. La sensibilidad de las cepas al tóxico se determinó por el área de inhibición del crecimiento y la concentración mínima inhibitoria de telurito. Las especies reactivas de oxígeno se estimaron por citometría de flujo utilizando las sondas diclorofluoresceína diacetato y dihidroetidina. La actividad GDH se determinó espectrofotométricamente y por actividad in situ en geles nativos. Los niveles de transcritos de gdhA se determinaron mediante qPCR en E. coli expuesta o no a telurito. El contenido de KG en ΔgdhA por HPLC. La actividad GDH disminuyó (~25%) y la transcripción de gdhA se reprime en E. coli expuesta al tóxico. La generación de ROS disminuyó y la concentración de KG aumentó en ΔgdhA expuesta al tóxico en comparación a la cepa silvestre. De este modo, la acumulación de KG no se relaciona con un aumento en la actividad GDH. Sin embargo, el aumento de KG ayudaría a la célula a enfrentar el estrés oxidativo generado por telurito.