Resumo

INTRODUCCIÓN Los biofilms son comunidades bacterianas adheridas a una superficie y embebidas en una matriz exopolimérica. Se considera que más del 60% de las enfermedades microbianas se asocia con la formación de biofilm. Se sabe que cepas no tipificables de H. influenzae (NTHi) forman biofilm en pacientes con otitis media; dicho fenómeno se estudió en modelos animales (chinchillas) de otitis media y los resultados sugieren que la formación de biofilm es determinante en la patogénesis. Hasta la fecha no se ha descrito formación de biofilm por cepas capsuladas; por lo cual, es importante establecer un modelo in vitro de formación de biofilm por H. influenzae (Hi) para cepas capsuladas y NTHi. MATERIAL Y MÉTODOS Se trabajó con 4 cepas de referencia de Hi ATCC: 10211, 33930, 49247 y 49766; 2 cepas son capsuladas (10211, 33930) y 2 NTHi (49247, 49766). Se estableció un modelo in vitro de formación de biofilm en microplacas, para lo cual se evaluaron las condiciones óptimas de formación de biofilm considerando tiempo, pH, temperatura, presencia/ausencia de factores X y V, concentración de glucosa y medio de cultivo (caldo BHI suplementado y caldo Levinthal). La semi-cuantificación del biofilm se hizo por el método de cristal violeta. Se determinó la cuenta viable mediante el método de Miles y Misra. Se hizo el análisis estadístico ANOVA y V de Cramer. ANÁLISIS DE RESULTADOS Se observó que cepas capsuladas y NTHi formaron biofilm; hasta la fecha, solo se había reportado formación de biofilm por NTHi. En el modelo in vitro, se encontraron diferencias significativas entre las variables, estableciendo las siguientes condiciones: 37ºC, 72 h, pH 7, presencia de factores X y V, concentración basal de glucosa (16 mM BHI suplementado, 19.4 mM Levinthal). El uso de uno u otro medio no afectó la formación de biofilm. El análisis estadístico demostró que la producción de biofilm no se relaciona con la presencia o ausencia de cápsula. Así mismo se observó que conforme incrementaba la biomasa, incrementaba el biofilm formado, lo que se confirmó estadísticamente. CONCLUSIONES Se establecieron las condiciones óptimas de formación de biofilm por Hi. Estadísticamente se estableció que el desarrollo de biofilm por Hi está estrechamente relacionado con la biomasa, no así con la presencia/ausencia de cápsula.