Resumo

Lysinibacillus sphaericus es una bacteria utilizad para el control biológico de mosquitos, el principal mecanismo de acción es la toxina binaria, conformada por BinA y BinB que son producidas durante los estadíos tempranos de la esporulación. Adicionalmente L. sphaericus presenta tres toxinas que se expresan en fase vegetativa, que son la Mtx-1, la Mtx-2 y la Mtx-3. La capa S es una estructura presente en la superficie de las células de eubacterias, está constituida por monómeros de proteína que son secretados y se ensamblan formando una estructura simétrica y porosa que sirve como interfase entre la célula y el ambiente. En un estudio anterior se determinó la actividad larvicida de la proteína de capa S extraída de cultivos en fase vegetativa de L. sphaericus. En este trabajo se clonó el gen que codificada para la proteína de capa S de L. sphaericus III(3)7 con el fin de comprobar la actividad larvicida de la proteína, adicionalmente se evaluó la interacción entre la proteína de capa S y la toxina binaria. Se clonó el gen que codifica para la proteína de capa S de L. sphaericus III(3)7 en pGEM y se subclonó en pET28b. Se transformó el constructo en Escherichia coli BL21(DE3). Se determinó que las mejores condiciones de inducción se lograron creciendo la bacteria transformada hasta una A600 de 0,5 a 37^oC y 200 rpm, después de adicionar IPTG se disminuye la temperatura a 30^oC y se incuba por 3 h. Posteriormente se purificó la proteína inducida con resina de níquel en condiciones denaturantes. Se realizaron los bioensayos en larvas de tercer instar de Culex quinquefasciatus, se obtuvo 89% de mortalidad con la proteína purificada, mientras que el extracto de proteínas no unidas a la resina de níquel no causó mortalidad en las larvas y el control positivo de la proteína de capa S aislada de L. sphaericus III(3)7 presentó 69% de mortalidad. Adicionalmente se evaluó el efecto sinérgico entre la toxina binaria y la proteína de capa S. Los resultados permitieron comprobar la actividad larvicida de la proteína de capa S de L. sphaericus III(3)7, por lo tanto esta proteína se puede considerar como una alternativa para mejorar la formulación de productos que presenten toxinas adicionales a la binaria con el fin de reducir la resistencia de C. quinquiefasciatus.