Resumo

Burkholderia cenocepacia está associada a pacientes fibrocísticos. Indivíduos portadores de fibrose cística (FC) possuem concentrações aumentadas dos íons Na+ e Cl-. Estudos realizados em nosso laboratório com o clone epidêmico ET-12 de B. cenocepacia em meios com altas concentrações de NaCl demonstraram o aumento na expressão do gene que codifica o “cable pilus”, uma importante adesina envolvida na aderência a células epiteliais respiratórias, na formação de biofilme e na produção de metaloproteases. Estes achados nos motivaram a investigar o papel do aumento dos níveis de Na+ e Cl- na produção de lípases e proteases por isolados clínicos de B.cenocepacia. Utilizamos em nosso estudo, 04 isolados clínicos procedentes de pacientes com FC. As amostras bacterianas foram cultivadas em meio Luria Bertani (LB) suplementado com 0,1M e 0,3M de NaCl a 30ºC por 18 horas a 150rpm. Após este período, as culturas foram centrifugadas e foram preparadas suspensões bacterianas com DO680nm=0,2. Alíquotas de 300l destas suspensões foram adicionadas a 30 mL de meio LB e meio LB contendo 0,1M e 0,3M de NaCl. Estas culturas foram cultivadas por mais 18 horas a 37ºC, centrifugadas a 2608g por 20 minutos e os sobrenadantes foram alíquotados a -20ºC. O “pellet” foi tratado com lisozima (0,2mg/mL) por 15 minutos a 37ºC e as bactérias foram lisadas por sonicação. Seguiu-se centrifugação dos lisados e os sobrenadantes aliquotados a -20ºC. A atividade proteásica e lipásica foram determinadas nos sobrenadantes e lisados pela degradação da azulcaseína e pela hidrólise do p-NPP, respectivamente. O meio suplementado com NaCl induziu o aumento da produção de proteases intracelular, determinada a partir dos lisados, que parece não ser liberada para o meio extracelular visto que não há alterações na atividade proteásica nos sobrenadantes não suplementados e suplementados com NaCl. Quanto à produção de lípase, os resultados sugeriram uma inibição na atividade lipásica tanto extracelular quanto intracelular. Estes achados sugerem que os níveis aumentados de Na+ e Cl- podem modular estes fatores de virulência bacterianos em indivíduos fibrocisticos.