XXI ALAM
Resumo:119-1


Poster (Painel)
119-1EXPRESIÓN PROTEICA DIFERENCIAL DE Piscirickettsia salmonis EN RESPUESTA ADAPTATIVA A DIFERENTES SISTEMAS DE CULTIVO
Autores:Tamara Vera (UACH - Universidad Austral De Chile) ; Alexei Cuevas (UACH - Universidad Austral De Chile) ; Jaime Figueroa (UACH - Universidad Austral De Chile) ; Joerg Reinders (UR - Universidad De Regensburg)

Resumo

Piscirickettsia salmonis es el agente causal del síndrome rickettsial salmonideo (SRS) el cual en los últimos treinta años ha causado grandes pérdidas en la industria chilena del salmón. Debido a la naturaleza intracelular de esta bacteria, los programas de control basados en antibióticos han tenido pobres resultados, lo que hace necesario mejorar la cantidad y calidad de la información que la industria maneja sobre este patógeno. P. salmonis, inicialmente fue descrito como un patógeno intracelular obligado y tan solo hace un par de años se logró cultivar en medios artificiales sólidos, libres de células. El presente trabajo presenta el montaje de un medio líquido logrando un crecimiento óptimo de esta bacteria, llegando a valores sobre 4,5 OD600nm, además de la optimización de la infección en línea celular SHK1, demostrando que la bacteria no pierde su capacidad de infección en línea celular posterior a múltiples pasajes en medio líquido. El montaje de la purificación intracelular de este patógeno desde la línea celular infectada, se realizó para posibilitar el posterior análisis de los patrones proteicos de la bacteria crecida intracelularmente y realizar la comparación con los patrones proteicos de esta bacteria cuando es cultivada en medio líquido. Dicha evaluación logró identificar 270 spot que presentan expresión diferencial bajo las 2 condiciones de estudio, de los cuales se identifico más de 70 proteínas a través de espectroscopia de masa, para lo cual se monto una base de datos de los ORF predichos en el genoma de esta cepa. Estos resultados se han obtenido mediante las técnicas de centrifugación isopícnica, SDS-PAGE, inmunocitoquímica, espectroscopia de masa y electroforesis bidimensional 2D-DIGE, cuyos resultados fueron evaluados con el programa Progenesis SameSpots. Los datos proporcionados aquí han permitido obtener información relevante sobre la expresión diferencial de proteínas de esta bacteria sometidas a las dos condiciones de cultivo ya descritas, lo cual nos podría indicar el probable mecanismo de infección de este patógeno y así posibilitar el idear una estrategia para el control de P. salmonis.


Palavras-chave:  2D DIGE, Cultivo Líquido, Piscirickettsia salmonis