Resumo

Pichia pastoris recombinante se caracteriza por presentar diversas ventajas que han favorecido que esta levadura metilotrófica sea utilizada como un eficiente sistema de expresión para la producción de proteínas heterólogas. Se ha empleado el metanol como un inductor de la expresión de proteínas sin embargo se ha observado que durante su metabolización se producen especies reactivas de oxígeno (ROS) que podrían afectar a la producción de proteínas heterólogas. Debido a eso es necesario analizar cómo influyen las condiciones de cultivo de esta levadura sobre la producción del daño oxidativo mediado por ROS con el fin de mejorar la producción de proteínas heterólogas. El objetivo del presente trabajo es determinar el daño oxidativo producido por el metanol y la temperatura en cultivos de Pichia pastoris recombinante. El estudio incluyó 3 cultivos expuestos a distintas temperaturas y concentraciones de metanol. Se evaluó el daño oxidativo en las membranas a través de la determinación de la peroxidación de lípidos mediante la medición de especies reactivas del ácido tiobarbitúrico (TBARs) y se evaluó mediante Western Blot la expresión de OGG1, una proteína involucrada en la reparación del daño oxidativo en el DNA nuclear y mitocondrial. Los resultados indican que Pichia pastoris recombinante cultivada a bajas temperaturas (10°C) presenta menores niveles de peroxidación lipídica que levaduras cultivadas a mayor temperatura (30°C). Se detectó la expresión de OGG1 en todas las muestras, observándose la presencia de la subunidad OGG1-1a en todas las muestras analizadas y la subunidad OGG1-2a sólo se observó en el cultivo expuesto a mayor temperatura. Nuestros resultados sugieren que la exposición a una mayor temperatura (30°C) y concentración de metanol (3% v/v) induce un mayor nivel de daño oxidativo en las membranas y una mayor expresión de la enzima reparadora del DNA en Pichia pastoris recombinante.