CLONAGEM DO GENE L1 DE BPV2 EM VETOR DE EXPRESSÃO BACTERIANO PPINPOINT GERANDO A CONSTRUÇÃO PPINPOINT-L1B2.

Felippe Barbosa Gomes (UFPE); Antonio Carlos Freitas (UFPE); André Luiz Santos Jesus (UFPE); Elyda Gonçalves Lima (UFPE)

Papilomavírus (PV) são vírus de DNA oncogênicos que infectam epitélios cutâneos e mucosos numa grande variedade de animais. PVs que infectam naturalmente animais têm sido amplamente explorados por serem considerados um modelo experimental ideal para o desenvolvimento de estratégias de controle das papilomaviroses, inclusive aquelas que afetam os humanos. O modelo baseado na infecção pelo PV Bovino (BPV) é descrito na literatura como um desses modelos e bastante eficaz para a compreensão da biologia viral. Além disso, no Brasil a papilomatose bovina é um importante problema econômico. Uma estratégia vacinal bastante promissora é baseada na produção de partículas virais não infectantes denominadas Virus-Like Particles (VLPs). As vacinas comerciais disponíveis baseiam-se na produção in vitro de VLPs formadas a partir de uma proteína do capsídeo viral do PV, chamada L1, sintetizada por sistemas heterólogos eucariontes. No entanto, tais vacinas são caras e conferem imunidade tipo específica. Por tais razões se faz necessário o desenvolvimento de estratégias vacinais mais baratas e polivalentes, principalmente no que diz respeito aos países emergentes como o Brasil. A produção de outras partículas virais mais simples, através de sistemas heterólogos procariontes, como bactérias, é uma alternativa bastante atrativa do ponto de vista econômico e da perspectiva de se obter imunidade contra vários tipos de PV numa só vacina. Neste trabalho foi feita a clonagem do gene que codifica a proteína L1 do BPV tipo 2 no vetor de expressão PinPoint (Promega), gerando a construção PinPoint-L1B2, que poderá ser usada na produção in vitro de capsômeros, mais economicamente viáveis que as VLPs. O fragmento de DNA correspondente ao gene L1 do BPV2 foi amplificado através de PCR e em seguida clonado no vetor de passagem pGEM-T Easy (Promega). Depois foi feita a subclonagem do inserto no vetor de expressão PinPoint obtendo-se a construção PinPoint-L1B2. A construção PonPoint-L1B2 é o primeiro passo para o desenvolvimento de uma estratégia vacinal baseada em partículas capsoméricas.

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