IDENTIFICAÇÃO MOLECULAR DE STAPHYLOCOCCUS SPP. RESISTENTES À METICILINA DIRETAMENTE DE HEMOCULTURAS PEDIÁTRICAS E ADULTAS.

Helene Bittencourt Berger (HCPA); Alice Beatriz Mombach Pinheiro Machado (HCPA); Fernanda de Paris (HCPA); Katia Pilger (HCPA); Rodrigo Minuto Paiva (HCPA); Afonso Luis Barth (HCPA)

Introdução: A bacteremia por Staphylococcus spp é uma das principais causas de infecção nosocomial. A rapidez da discriminação de Staphylococcus spp resistentes a meticilina tornou-se mais importante a partir de 2009 com a recomendação do CLSI (Clinical Laboratory Standard Institute) de determinar a resistência a vancomicina por CIM (concentração inibitória mínima) para estas bactérias. Ganha-se tempo pesquisando o gene mecA, determinante da resistência aos β-lactâmicos, utilizando-se a reação de PCR diretamente da hemocultura. A detecção molecular é dificultada pela presença de substâncias que reduzem a eficiência da PCR. Um agente inibidor importante é o anticoagulante polianetolsulfonato de sódio (SPS). O objetivo deste estudo é determinar um método de extração de DNA diretamente de hemocultura para identificação de Staphylococcus spp resistentes à meticilina através da PCR. Materiais e métodos: As amostras de hemoculturas em sistema automatizado (BacT/Alert 240® - BioMeuriex Inc) positivas para Staphylococcus spp resistente à meticilina foram submetidas a diferentes tratamentos: (a) centrifugação para retirada de carvão ativado; (b) lavagem com substância alcalina; (c) lise de eritrócitos com tampão de lise; (d) lise de eritrócitos com água e incubação a 57ºC por 10 minutos; (e) lise de eritrócitos com água e saturação do SPS com tampão MgCl₂  e incubação a 57ºC por 10 minutos. Após cada tratamento as amostras foram submetidas a lise térmica e o DNA foi extraído utilizando o kit comercial Qiagen®. A PCR para o gene mecA foi executada de acordo com Vannuffel et al (1995). Resultados e discussão: Foram testadas 16 hemoculturas positivas identificadas com Staphylococcus spp que se apresentaram resistentes a oxacilina pelo método de disco difusão. O método (d) provou ser efetivo na inativação de inibidores na hemocultura e apresentou 93,7% de correlação com a cultura e método de disco difusão. Apenas o método (e) foi efetivo em amostras de hemocultura pediátricas. Os demais métodos, independente do tipo de hemocultura (pediátrica ou adulta) não apresentaram concordância com os métodos fenotípicos. Conclusão: A lise de eritrócitos com água, juntamente com a ação do MgCl2 (método “e”), mostrou-se como  método mais efetivo neste estudo.