CLASSIFICAÇÃO FILOGENÉTICA PRELIMINAR DE ESCHERICHIA COLI ENCONTRADA EM CARNES DE ESTABELECIMENTOS COMERCIAIS DO MUNICÍPIO DE PETROLINA

Jamille Cristina Pereira Cordeiro (UNIVASF); Mateus Matiuzzi da Costa (UNIVASF); Maria Luciana Lira de Andrade (UNIVASF); Michely Correia Diniz (UNIVASF); René Geraldo Cordeiro Silva Junior (UNIVASF)

A Escherichia coli é uma bactéria de grande importância na saúde humana e animal. A infecção causada por essa bactéria pode ocasionar distúrbios como diarréia, infecção no trato urinário, septicemia, entre outros. Atualmente, análises filogenéticas têm sido utilizadas objetivando a investigação de genes de virulência em determinadas cepas.  Estudos demonstram que amostras de E. coli podem ser divididas em quatro grupos filogenéticos designados A, B1, B2 e D, os quais são atualmente pesquisados através dos genes chuA (279 pb) e yja (211 pb), e um fragmento chamado de TSPE.4C2 (152 pb) derivado de biblioteca subtrativa desenvolvida por CLERMONT et al. (2000). O objetivo desse trabalho foi agrupar filogeneticamente de cepas Escherichia coli, coletadas de carnes em feiras e supermercados do município de Petrolina. Dezenove (19) cepas foram semeadas com auxílio de swab e alça de platina em meio Mac Conkey, sendo as placas incubadas por 24 horas a 37ºC. As colônias suspeitas foram identificadas por suas características, morfológicas, bioquímicas e tintoriais, conforme QUINN et al. (1994). As colônias isoladas das culturas positivamente identificadas com E.coli foram repicadas para TSA (Triptic Soy Agar) e utilizadas na caracterização molecular dos isolados. Logo após, as colônias foram utilizadas para extração do DNA bacteriano, onde se realizou a suspensão em 50 mL de água Mili-Q, fervida a 100ºC, por 5 minutos. O lisado foi centrifugado e o DNA utilizado como molde para reação em cadeia da polimerase (PCR). A PCR foi realizada utilizando iniciadores específicos para os genes chuA, yja e o fragmento TSPE.4C2. A seqüência dos iniciadores, temperatura de anelamento e peso molecular dos produtos foram realizados conforme CLERMONT et al. (2000). Os produtos da PCR foram analisados em gel de agarose 1,0%, corado com brometo de etídio e visualizado em transiluminador sob luz UV. Os resultados mostraram que do total das 19 amostras estudadas, 3 (15,79%) foram classificadas no grupo filogenético A, 8 (42,10%) no grupo B1, 3 (15,79%) no grupo B2 e 5 (26,31%) amostras no grupo D.  Estudos similares revelam que cepas dos grupos B2 e D são conhecidas por possuírem mais fatores de virulência do que as pertencentes aos grupos A e B1, neste sentido, verificou-se que 42,10 % das bactérias encontradas nas amostras de carne estão classificadas como as de maior grau de virulência.