OBTENÇÃO DE MUTANTES TRANSPOSON MINI-TN5 DE BURKHOLDERIA SACCHARI PARA PRODUÇÃO DO COPOLÍMERO POLI(3-HIDROXIBUTIRATO-CO-3-HIDROXIHEXANOATO) [P(3HB-CO-3HHX)

Thatiane Teixeira Mendonça (USP); José Gregório Cabrera Gomez (USP); Nuri Andrea Merchan Castellanos (USP); Juan Guillermo Rueda-buitrago (USP); Luiziana Ferreira da Silva (USP)

Polihidroxialcanoatos (PHA) são poliésteres produzidos por diversas bactérias a partir de fontes renováveis que despertam grande interesse por suas propriedades elastoméricas e/ou termoplásticas e por serem biodegradáveis. Poli-3-hidroxibutirato-co-3-hidroxihexanoato [P(3HB-co-3HHx)] pertence à classe dos PHA e é produzido por Burkholderia sacchari a partir de glicose e ácido hexanóico, porém, a fração de 3HHx acumulada ainda é pequena. O aumento das frações deste monômero no copolímero pode melhorar as propriedades mecânicas e diversificar suas aplicações, tornando-o interessante do ponto de vista industrial e acadêmico. Tendo por objetivo o aumento da fração de 3HHx, foram obtidos mutantes de B. sacchari com o uso de transposon mini-Tn5, buscando-se por aqueles incapazes de crescer em ácido hexanóico (hx^-), mas ainda capazes de utilizar este substrato para produzir PHA. De 1620 mutantes testados obtiveram-se 3 clones hx^-, os quais foram avaliados quanto à capacidade de acúmulo do copolímero de interesse. Inicialmente, os clones mutantes, agora denominados LFM838, LFM839 e LFM840, mostraram-se capazes de acumular PHA quando testados em meio sólido contendo o corante indicador Sudan Black B que cora colônias produtoras deste polímero em azul. Posteriormente, para verificar a real capacidade dos clones mutantes produzirem [P(3HB-co-3HHx)], realizaram-se experimentos de acúmulo de PHA em meio mineral contendo glicose na concentração de 5g/L e ácido hexanóico a 0,25, 0,5, 1,0, 1,5 e 2,0 g/L. A partir desses cultivos, foram determinadas as concentrações de PHA acumuladas e sua composição utilizando análises de cromatografia gasosa. Nestes ensaios a produção de PHA pelos clones pôde ser avaliada e comparada com o controle, B. sacchari selvagem, cuja proporção do monômero 3HB no copolímero é 98,3 mol% quando a de 3HHx atinge cerca de 1,7 mol% a partir de glicose na concentração 5g/L e ácido hexanóico a 1g/L.