PAPEL DO FLAGELO NA ADESÃO E FORMAÇÃO DE BIOFILME DE UMA AMOSTRA DE ESCHERICHIA COLI ENTEROPATOGÊNICA QUE CO-EXPRESSA OS PADRÕES DE ADESÃO LOCALIZADA E AGREGATIVA

Bruna Gil Garcia (UNIFESP); Suely Carlos F. Sampaio (UNIFESP); Dennys Monteiro Girão (UFRJ); Tânia A. T. Gomes (UNIFESP)

Recentemente identificamos, em estudo epidemiológico conduzido no Rio de Janeiro, amostras de Escherichia coli que apresentavam um padrão de adesão híbrido AL (adesão localizada) e AA (adesão agregativa), e formavam biofilme in vitro. Estas propriedades identificam os patotipos diarreiogênicos EPEC (E. coli enteropatogênica) e EAEC (E. coli enteroagregativa), respectivamente. Com base na ocorrência de genes de virulência de EPEC e ausência de marcadores genéticos de EAEC, essas amostras foram classificadas como EPEC. A ocorrência de amostras de EPEC expressando o fenótipo híbrido AL/AA, que associa a capacidade de formar a característica lesão attaching-effacing (lesão A/E) provocada pela EPEC com a formação de biofilme de EAEC, poderia potenciar a colonização intestinal. A identificação de fatores bacterianos envolvidos na formação de biofilme poderá contribuir para o estabelecimento de medidas de prevenção de infecções por estas bactérias. Como já foi demonstrado que o flagelo é  necessário para adesão e formação de biofilme em algumas espécies bacterianas, neste estudo o papel do flagelo no fenótipo de adesão híbrido (AL/AA) e no estabelecimento de biofilme de uma amostra selecionada (99245) foi investigado. Inicialmente, foi utilizado um soro policlonal contendo anticorpos anti-flagelina H6 (homóloga), o que levou a uma moderada inibição de adesão a células HeLa e superfícies abióticas. A seguir, identificou-se um estoque da amostra 99245 que apresentou capacidade aderente e de formação de biofilme reduzida, quando comparada à dos demais estoques. Ao inocular em meio semi-sólido, verificou-se também que as bactérias do estoque com expressão de adesão reduzida moviam-se com maior dificuldade do que aquelas dos demais estoques. Após ativação da motilidade em diversos repiques em meios semi-sólidos, verificou-se que a ativação da motilidade restaurou a capacidade de formar o padrão AL/AA e produzir biofilme. Mutantes no gene fliC (que codifica a flagelina, proteína que compõe a estrutura do flagelo) da amostra 99245 com sistema que emprega o fago lred estão sendo construídos para comprovar nossos achados preliminares da participação do flagelo no estabelecimento do padrão hibrido e da formação de biofilme.