CONTRIBUIÇÃO DO SISTEMA DE SECREÇÃO DO TIPO TRÊS PARA O POTENCIAL DE VIRULÊNCIA DE UMA AMOSTRA DE ESCHERICHIA COLI ENTEROPATOGÊNICA ATÍPICA

Suely Carlos F. Sampaio (UNIFESP); Fabiana C. Moreira (UNIFESP); Ana Liberatore (UNIFESP); Ivan Hong Jun Koh (UNIFESP); Rodrigo T. Hernandes (UNIFESP); Tânia A. T. Gomes (UNIFESP)

Escherichia coli enteropatogênica atípica (aEPEC) injeta várias proteínas efetoras em células intestinais utilizando um Sistema de Secreção do Tipo Três (SST3), o que resulta na formação de lesão conhecida como attaching-effacing. Neste estudo, foi analisado o papel do SST3 na capacidade da aEPEC 1711-4 de associar-se com células intestinais polarizadas in vitro e de translocar a parede bacteriana, alcançando sítios extra-intestinais em modelo experimental de translocação bacteriana (TB) in vivo. Para impedir a montagem do SST3, o gene escN foi submetido a mutagênese. Células Caco-2 e T84 diferenciadas foram infectadas com as amostras selvagem e mutante e incubadas por 3 h ou 48 h. Os índices de associação e invasão (3 h), e persistência no meio intracelular (24 h) foram calculados após lise celular e contagem de bactérias recuperadas, antes e após tratamento com gentamicina. Para os experimentos de TB, aEPEC 1711-4 e mutante isogênica foram inoculadas em ratos Wistar-EPM (n=11), por sondagem oroduodenal. Após 2 h, foi coletado 1 ml de sangue da veia cava inferior, seguindo-se excisão de linfonodos do mesentério (LMN), baço e fígado, e semeadura e contagem de bactérias recuperadas para determinação da relação do número de bactérias por grama de órgão (CFU/g). A amostra mutante apresentou redução nos índices de associação e invasão nas duas linhagens celulares. A média dos índices de invasão obtida com a amostra selvagem foi similar nas duas linhagens [Caco-2, 12.1% (9.2%) e T84, 10.5% (2.0 %]. Com o mutante, os índices foram inferiores em Caco-2 [8.6 % (3.2%)] enquanto em T84 foram superiores [23% (16.6%)] em relação aos da amostra selvagem. Tanto a amostra selvagem como seu mutante isogênico persistiram em compartimento intracelular por até 48 h sem evidência de multiplicação intracelular. Com relação à capacidade de translocação, nos animais infectados com a amostra mutante, foi observada redução na TB em todos os compartimentos analisados: LMN, de 100% para 50%; fígado, de 46.5% para 12.5%; e baço, de 46.5% para 0%.  Estes achados indicam que proteínas efetoras secretadas pelo SST3 são necessárias para uma eficiente associação da aEPEC 1711-4  em células Caco-2 e T84, assim como para a translocação bacteriana in vivo. Tais proteínas também podem estar envolvidas na invasão de células Caco-2, mas não de T84.