EXPRESSÃO DO RNAM PARA INOS E ARGINASE EM MACRÓFAGOS MURINOS ESTIMULADOS IN VITRO COM BORDETELLA PERTUSSIS

Priscila Iamashita (IBU); Cynthia Soares Galhardo (IBU); Diego Gabriel Mafra (IBU); Ludmila Bezerra da Silva (IBU); Angela Silva Barbosa (IBU); Monamaris Marques Borges (IBU)

INTRODUÇÃO: Bordetella pertussis é um cocobacilo Gram-negativo, agente causador da coqueluche. Apesar da ampla cobertura vacinal, essa bactéria continua sendo um grave risco para a saúde humana. Os macrófagos são uma das primeiras barreiras naturais de defesa do organismo. Estas células após ativação produzem óxido nítrico (NO) que aumenta sua atividade microbicida e regula a expressão de genes envolvidos na resposta inflamatória. A expressão da enzima iNOS nestas células é fundamental para gerar NO. Por outro lado, a arginase compete com a iNOS por usar o mesmo substrato L-arginina, reduzindo a produção de NO e favorecendo a sobrevida dos microrganismos intracelulares. Neste trabalho será analisado, a nível molecular, algumas estratégias utilizadas por B. pertussis para regular a atividade de macrófagos durante a invasão celular. MATERIAS E MÉTODOS: Macrófagos derivados de medula óssea (MfDM) de camundongos C57BL/6 foram diferenciados por 7 dias em meio RPMI suplementado com 10% de SFB, 20% de sobrenadante de L929, 50 U/ml penicilina, 50 mg/ml streptomicina e aminoácidos não essenciais. MfDM foram ativados com antígeno solúvel de B. pertussis (30 mg/ml) na presença ou não de IFN-g por 6 e 24 hs. O RNA total das células foi obtido utilizando o reagente Trizol (Invitrogen). Dois mg de RNA total foi convertido em cDNA. Posteriormente a reação de RT-PCR foi realizada usando os primers sense e antisense, respectivamente, para iNOS: AGGAAGAAATGCAGGAGATG e CACCTGCTCCTGGCTCAAG (253-bp); arginase: TTCTGGGAGGCCTATCTTAC e CCAAGGTTAAAGCCACTGCC (162-bp); b-actina: ACTACATTCAATTCCATCAT e CGATCCACACAGAGTACTTG (196-bp). Os produtos de amplificação foram analisados por eletroforese em gel de agarose 2% em TAE 1x, corados com brometo de etídio e visualizados através de luz UV. RESULTADOS e CONCLUSÃO: Houve aumento da expressão do RNAm para iNOS e arginase I em macrófagos estimulados com antígeno de B. pertussis, apesar destas células não produzirem óxido nítrico, mas sintetizarem arginase. Isto sugere a existência de mecanismos que regulam a transcrição da iNOS durante esta infecção. Financiamento: FAPESP e CNPq. Palavras-chave: Bordetella pertussis, macrófagos, óxido nítrico, iNOS, arginase.