EXPRESSÃO DO GENE L1 DE PAPILOMAVÍRUS BOVINO TIPO 1 E 4 EM LEVEDURA PICHIA PASTORIS

André Luiz Santos de Jesus (UFPE); Helder Melo de Souza (UFPE); Filipe Colaço Mariz (UFPE); Eliane Campos Coimbra (UFPE); Júlia Furtado Campos (UFPE); Marcelo Nazário Cordeiro (UFPE); Antonio Carlos de Freitas (UFPE)

Os papilomavírus são conhecidos por causarem lesões tumorais, geralmente benignas, em tecidos epiteliais de diversos organismos, que podem sob condições adequadas progredirem para o câncer. O papilomavírus bovino (BPV) tem sido amplamente caracterizado tanto por ser considerado um modelo experimental ideal para o estudo do papilomavírus humano, quanto por sua grande importância na bovinocultura, sendo associados à papilomatose cutânea, tumores na bexiga (hematúria enzoótica) e no trato digestivo superior. A papilomatose bovina, embora não caracterize um processo carcinogênico, é uma doença importante economicamente por causar desvalorização dos animais a serem comercializados. A proteção contra a infecção por BPV é conferida por anticorpos neutralizantes direcionados contra a proteína do capsídeo L1. Esses anticorpos podem ser eficientemente induzidos por imunização com virus-like particle (VLP), que são formadas espontaneamente após a expressão do gene L1 em sistemas de expressão heteróloga. A levedura Pichia pastoris é um sistema de expressão eficiente e de baixo custo para produção de altos níveis de proteínas, além de apresentar vantagens em relação a outros sistemas. Neste trabalho foi avaliado a possibilidade do uso do sistema de expressão heteróloga baseado em células da levedura P. pastoris para a produção da proteína L1 do capsídeo do papilomavírus bovino tipo 1 e 4. Os genes L1 foram amplificados por PCR a partir do genoma completo de BPV 1 e 4 e clonados no vetor de expressão pPICZA, sob o controle do promotor induzível AOX1. As células de P. pastoris foram transformadas com as construções pPICZAL1B1 e pPICZAL1B4 e os recombinantes de P. pastoris obtidos foram analisados para expressão do gene L1 por RT-PCR e Dot blot. Os transformantes analisados mostraram transcrição do gene e conseqüente produção da proteína L1 de BPV 1 e 4, porém em baixos níveis. Os resultados apresentados mostram a confirmação do uso de P. pastoris como um sistema de expressão viável para produzir proteínas de BPV. Estes resultados, em combinação com algumas adaptações, como a otimização das sequências gênicas e da padronização da produção de proteína L1 em fermentadores, poderá aumentar a produtividade e, conseqüentemente, a produção de VLPs em larga escala.