CARACTERIZAÇÃO INTER E INTRA-ESPECÍFICA DE ESTIRPES ELITE DE RIZÓBIO

Juscélio Donizete Cardoso (UEL); Douglas Fabiano Gomes (UEL); Maria Aparecida de Matos (IAPAR); Diva Souza Andrade (IAPAR); Mariangela Hungria (Embrapa)

No Brasil, três estirpes de Rhizobium tropici tipo B (SEMIAs 4077=CIAT899, 4080=PRF81 e 4088=H12)  são autorizadas para produção de inoculantes para a cultura do feijoeiro (Phaseolus vulgaris L.). Programas de pesquisa para seleção de estirpes de rizóbios têm buscado a eficácia e estabilidade das características da fixação biológica do nitrogênio. Porém, antes de uma avaliação da eficácia dessas bactérias em experimentos de campo, uma caracterização inter e intra específica é quase uma exigência. Neste sentido, foi realizada a caracterização inter e intra-específica de 45 estirpes elite de rizóbios microssimbiontes de feijoeiro, pré selecionadas para eficácia simbiótica. Foram utilizadas 45 estirpes elite (IPR Pv-) provenientes da Coleção de Microrganismos de Interesse do Agronegócio do Laboratório de Microbiologia do Solo do Instituto Agronômico do Paraná.  Para comparar foram incluídas as estirpes tipo de Rhizobium que nodulam efetivamente o feijoeiro: R. tropici A e B (CFN299, CIAT899); R. leguminosarium bv phaseoli (ATCC10004); R. etli (CFN42); R. giardini (H152); R. galicum (R602sp) e, as SEMIAs 4080 e 4088. As análises de agrupamento com base no polimorfismo dos produtos da amplificação com primers do RFLP-PCR-16S (inter específica) e BOX A1R-PCR (intra específica) das estirpes foram realizadas usando o algoritmo UPGMA e o coeficiente de Jaccard. Pela técnica do PCR-RFLP do 16S rDNA permitiu agrupar 34 estirpes IPR-Pv juntamente com as tipos que nodulam o feijoeiro além das R. tropici (SEMIA4080 e 4088). Através da análise do dendrograma obtido por BOX-PCR, todas as estirpes analisadas apresentaram perfil distinto, com exceção de cinco pares de IPR-Pv que se agruparam com 100% de similaridade. Pelas análises moleculares, verifica-se que o BOX-PCR é discriminatório de estirpe caracterizando cada uma, enquanto, a do RFLP-PCR 16S RNAr é discriminatório dentro do gênero e que, existe  alta diversidade genotípica nessa população de estirpes pré selecionadas para eficácia na fixação biológica do nitrogênio.