AVALIAÇÃO DE PCR DIRETO DE MATERIAL CLÍNICO NO DIAGNÓSTICO DA BRUCELOSE BOVINA

Elaine Maria Seles Dorneles (UFMG); Juliana Pinto da Silva Mol (UFMG); Rebeca Barbosa Pauletti (UFMG); Silvia Minharro Barbosa (UFT); Andrey Pereira Lage (UFMG)

O diagnóstico da brucelose bovina é confirmado pela demonstração de Brucella spp. pelo isolamento ou detecção de antígenos ou material genético, ou ainda pela demonstração de anticorpos específicos. A reação em cadeia da polimerase é altamente específica, sensível e facilmente adaptada a uma elevada demanda diagnóstica, podendo contribuir para o PNCEBT com testes diagnósticos de maior acurácia e rapidez. O objetivo deste estudo foi avaliar a PCR realizada diretamente de espécimes clínicos no diagnóstico da brucelose bovina. Duzentas e vinte e nove amostras de linfonodos ilíacos-internos, supra-mamários e inguinais e amostras de lesões de ligamento cervical, provenientes de bovinos abatidos com sorologia positiva para brucelose foram submetidas ao cultivo e a PCR. Uma alíquota do homogeneizado de cada amostra usada foi mantida a -20^oC e posteriormente submetida a centrifugação a 14000 x g por 5 min. O sedimento foi então ressuspendido em Tris-EDTA e inativado a 85^oC por duas hora para a extração de DNA. Três diferentes métodos de extração de DNA foram testados: fenol-clorofórmio, fervura por 15 minutos e isotiocianato de guanidina. O gene bcsp31, conservado entre todas as espécies de Brucella spp., foi amplificado com os iniciadores B4/B5. A reação foi otimizada (concentração de MgCl₂, albumina sérica bovina e DNA) para análise de amostras clínicas. A extração de DNA pelo isotiocianato de guanidina apresentou os melhores resultados para a amplificação do gene bcsp31. Das 229 amostras de material clínico trabalhadas foram isoladas e identificadas como Brucella abortus 76 e 27 apresentaram-se positivos na PCR. Cento e noventa e três amostras clínicas apresentaram resultados concordantes nos dois testes: 15 amostras foram positivas e 141 negativas em ambos os testes. A concordância entre o isolamento e a PCR foi baixa (Kappa 0,142) e as diferenças entre os testes foram significativas (χ² McNemar = 31,56 ; P<0,001). A PCR realizada diretamente de material clínico apresentou-se pouco promissora como ferramenta exclusiva para o diagnóstico da brucelose bovina, podendo ser empregada como método auxiliar de diagnóstico. Agradecimentos: Fapemig, Capes, CNPq e FEP-MVZ Coordenação Preventiva.