TIPAGEM MOLECULAR POR RAPD-PCR DE ISOLADOS DE CRYPTOCOCCUS NEOFORMANS, CRYPTOCOCCUS ALBIDUS E CRYPTOCOCCUS LAURENTII

Joseane Cristina Ferreira (Univ. São Paulo); Karen Regina Carim Costa (Univ. São Paulo); Regina Celia Candido (Univ. São Paulo); Reginaldo Santos Pedroso (Univ.Fed. Uberlândia)

Introdução. Cryptococcus neoformans e outras espécies do gênero podem causar infecções em humanos e animais, e frequentemente são isoladas de diversas fontes do ambiente, como excretas de aves, vegetais e madeira em decomposição. Métodos moleculares de tipagem são ferramentas importantes na caracterização de leveduras, sendo utilizados em estudos epidemiológicos e tipagem de diferentes micro-organismos. Dentre os métodos moleculares, a técnica de RAPD é a de escolha para a tipagem de várias espécies de fungos. Objetivo. O objetivo do presente trabalho foi analisar o perfil molecular de isolados ambientais de Cryptococcus neoformans, C. albidus e C. laurentii, utilizando três oligonucleotídeos iniciadores, por RAPD-PCR. Método. Foram utilizados 10 isolados de cada uma das espécies e 2 cepas ATCC de C. neoformans (90112 e 28957). A PCR foi realizada com os oligonucleotídeos CAV2 (5'-AACGCGCAAC-3'), ZAP19 (5'-AAGAGCCCGT-3') e ZAP20 (5'-GCGATCCCCA-3'), e os produtos amplificados foram submetidos à corrida eletroforética em gel de agarose. A partir dos dados obtidos, foi utilizado o coeficiente de Jaccard, e gerado dendrogramas pelo método de agrupamento UPGMA. Resultados. Pela análise dos dendrogramas, os isolados de C. neoformans formaram 2 grupos com CAV2 (similaridade 0,333 a 1,000), 6 com ZAP19 (0,453 a 1,000) e 3 com ZAP20 (0,268 a 1,000). Os isolados de C. albidus formaram 3 grupos com CAV2 (0,211 a 1,000) e ZAP19 (0,444 a 1,000), e 4 com ZAP20 (0,326 a 1,000). Os isolados de C. laurentii apresentaram similaridade variando de 0,072 a 0,667 com CAV2, de 0,169 a 0,625 com ZAP19, e de 0,276 a 0,833 com ZAP20, não formando grupos. Conclusão. A maior variabilidade genética intra-espécie foi observada entre os isolados de C. laurentii com os três oligonucleotídeos utilizados. Para C. neoformans o oligonucleotídeo ZAP19 discriminou melhor os isolados da espécie, e para C. albidus, ZAP20 mostrou melhor discriminação.