INTERAÇÃO DE UMA AMOSTRA DE ESCHERICHIA COLI ENTEROPATOGÊNICA (EPEC) ATÍPICA COM ESTRUTURAS RICAS EM COLESTEROL EM MONOCAMADAS DE CÉLULAS HELA E CÉLULAS INTESTINAIS CACO-2 DIFERENCIADAS IN VITRO.

Denise Yamamoto (UNIFESP (DMIP)); Tânia Gomes (UNIFESP (DMIP))

O patotipo Escherichia coli enteropatogênica (EPEC) é sub-dividido em EPEC típica (tEPEC) e EPEC atípica (aEPEC), tendo por base a presença do plasmídeo EAF (EPEC adherence factor) em tEPEC e sua ausência em aEPEC. Por várias décadas tEPEC constituiu o principal agente de diarréia infantil em nosso meio, mas sua freqüência vem diminuindo enquanto as aEPEC têm sido encontradas em várias regiões geográficas e faixas etárias. Recentemente, demonstramos que amostras de aEPEC portadoras de diferentes subtipos de intimina (proteína adesiva) invadem células HeLa e células intestinais T84 diferenciadas in vitro com índices significantemente maiores que os da amostra protótipo tEPEC E2348/69. Demonstramos também que o pré-tratamento de células HeLa por citocalasina D promove diminuição da porcentagem de invasão por aEPEC 1551-2 (sorotipo O não tipável, imóvel), e que o pré-tratamento de monocamadas diferenciadas de células T84 com ácido etileno-glicol tetra-acético (EGTA) promove aumento significativo da invasão bacteriana. Neste estudo, avaliamos a ocorrência de invasão por aEPEC 1551-2 e tEPEC E2348/69 em células intestinais Caco-2 diferenciadas, utilizando ensaio de proteção com gentamicina (EPG). Adicionalmente, avaliamos a participação de estruturas da membrana de células HeLa e Caco-2, ricas em colesterol, no processo de invasão. Para essa finalidade, aEPEC 1551-2 foi inoculada (10⁷ UFC) sobre monocamadas incompletas de células HeLa (10⁵ células/poço) e Caco-2 diferenciadas (10⁵ células/14 dias de cultivo), pré-tratadas ou não por diferentes concentrações de metil-beta-ciclodextrina (MβCD) seguidas pelo EPG. A amostra protótipo de tEPEC E2348/69 foi utilizada como controle de acordo com dados da literatura que relataram o efeito redutor da aderência desta amostra após a remoção de colesterol de membranas celulares. Nossos dados demonstraram que aEPEC 1551-2 invade células Caco-2 diferenciadas com índice significativamente maior que o da tEPEC E2348/69 (7,5% ± 1,7 e 1,8% ± 0,6, respectivamente). Observamos também que o tratamento prévio das monocamadas de celulares por MbCD promove diminuição da aderência bacteriana e conseqüentemente, da invasão das amostras aEPEC 1551-2 e tEPEC E2348/69, de maneira dose dependente. Nossos dados sugerem a interação de estruturas bacterianas com lipid rafts e/ou caveolas.