| Área: Fermentação e Biotecnologia ( Divisão J ) CONSTRUÇÃO DE VETORES DE CLONAGEM PARA EXPRESSÃO DE TRANSPORTADORES DE PENTOSES EM S. CEREVISIAE VISANDO PRODUÇÃO DE ETANOL. Belisa Bordin de Sales (ICB II); Ana Raquel Souza Monteiro (ICB II); Elisabete José Vicente (ICB II)
ResumoNa tentativa de construção de linhagens de leveduras capazes de produzir etanol a partir de hidrolisados de cana-de-açúcar, onde as pentoses são os açúcares presentes em maior concentração, o transporte de pentoses (xilose e arabinose) para dentro da célula vem sendo extensamente estudado, sendo que vários autores concluíram que a captação do açúcar é a etapa limitante para a produção de etanol (Stephanopoulos, 2007). Uma vez que ainda não foi descoberto um sistema específico para o transporte ("uptake") de pentoses, acredita-se que a captação de xilose por leveduras seja mediada de forma não específica pelo sistema de transportadores de hexoses (Hamacher et al., 2002; Hahn-Hägerdal et al., 2007).
O objetivo deste trabalho é a construção de cassetes de expressão dos genes HXT5 e HXT7, amplificados por PCR a partir do DNA genômico da linhagem de S.cerevisiae S288C; e a inserção de múltiplas cópias destes cassetes de expressão no genoma de linhagens de S.cerevisiae empregadas em usina sucro-alcooleiras.
Neste momento, os genes HXT5 e HXT7 foram anplificados e inseridos, respectivamente, nos vetores comerciais pGEM-T (Vector Systems, Promega) e TOPO (Invitrogen). O sucesso da obtenção destas construções foi confirmado por análises de restrição e sequenciamentos. Na próxima etapa, os genes HXT5 e HXT7 serão clonados no vetor bifuncional pMA91, sob a regulação do promotor e do terminador de transcrição do gene PGK de S. cerevisiae. Em seguida, os fragmentos de DNA contendo os cassetes de expressão PGK-HXT5 e PGK-HXT7 serão purificados e inseridos no vetor pGEM-Teasy-d, previamente construído em nosso laboratório (Guerra et al., 2006). Isto permitirá a inserção de múltiplas cópias dos cassetes de expressão desejados no genoma de linhagens S. cerevisiae selvagens.
APOIO: CAPES
Palavras-chave: Transportadores de pentoses, S. cerevisiae, etanol |