PROPRIEDADES HIDROFÓBICAS, ADESÃO E INVASÃO EM CÉLULAS EPITELIAIS E EXPRESSÃO GÊNICA EM AGGREGATIBACTER ACTINOMYCETEMCOMITANS

Priscila Larcher Longo (USP); Marcia Pinto Alves Mayer (USP); Ana Carla Robato Nunes (USP); Josely Emiko Umeda (USP)

Aggregatibacter actinomycetemcomitans associado à periodontite, é capaz de aderir e invadir células epiteliais. Sabe-se que as condições de cultivo influenciam estes processos, porém não está elucidada a regulação dos genes associados. Objetivo: analisar a expressão de diferentes genes associados à virulência e características de hidrofobicidade e capacidade de adesão e invasão de culturas de A. actinomycetemcomitans desenvolvidas em diferentes condições. Métodos: células de A. actinomycetemcomitans VT1169, desenvolvidas em microerofilia e anaerobiose até início e final da fase log de crescimento, foram testadas quanto a sua capacidade de aderir ao n-hexadecano e aderir e invadir células KB. A transcrição gênica foi determinada por RT –PCR. Resultados: células em cultura final de fase log, em microaerofilia e anaerobiose, mostraram-se mais hidrofóbicas do que em início da fase.  Células cultivadas em anaerobiose mostraram-se mais hidrofílicas do que as cultivadas em microaerofilia. Células em início de fase log em microaerofilia apresentaram maior eficiência de adesão a células KB do que aquelas cultivadas até final de fase log. Esta diferença em relação à fase da cultura não foi observada em anaerobiose.  A capacidade de invasão permaneceu inalterada em cultura em microaerofilia, mas foi maior para as células cultivadas até final de fase log em anaerobiose. Não foi detectada expressão de omp100, ltxA, flp, cagE  e orf859. O gene pgA foi mais expresso nas células cultivadas até final de fase log em microaerofilia. Os genes vapA, emaA e cdtB foram expressos de maneira similar entre células cultivadas em anaerobiose e aquelas cultivadas até final de fase log em microaerofilia. A expressão de vppA seguiu o mesmo padrão de expressão em microaerofilia porém em anaerobiose, a cultura em início de fase log apresentou menor expressão quando comparada à cultura em final da fase. apaH foi mais expresso nas células cultivadas até final de fase log em microaerofilia e o gene omp29 foi mais expresso nas células cultivadas em final de fase log em anaerobiose, sugerindo sua associação com a  maior capacidade de invasão da amostra neste momento. A expressão de aae foi maior, para as células cultivadas em microaerofilia ou anaerobiose, em final da fase log. Estes dados indicam que o potencial REDOX e metabólitos secundários influenciam a expressão de genes associados a fatores de virulência e de proteínas de superfície associadas à hidrofobicidade celular de A. actinomycetemcomitans. Apoio Financeiro FAPESP 03/08598-0 e 03/01192-9