ANÁLISE DA DIVERSIDADE BACTERIANA EM AMOSTRAS DE INFECÇÃO ENDODÔNTICA PRIMÁRIA

Adriana da Costa Ribeiro (ICB/USP); Marcelo Faveri (FO-UNG); Denise Maria Zezell (IPEN/USP); Marcia Pinto Alves Mayer (ICB/USP)

Estima-se que a cavidade bucal apresente aproximadamente 700 espécies de bactérias, sendo que mais de 50% destas espécies ainda não foram cultivadas, e possivelmente dentre estas últimas muitas podem ser associadas com patologias. Objetivo: avaliar a diversidade bacteriana em casos de infecção endodôntica primária por clonagem e sequenciamento do gene 16S rRNA. Métodos: Foram coletadas amostras do conteúdo microbiano do canal radicular de 14 dentes assintomáticos com evidência clínica de necrose pulpar, antes do tratamento endodôntico. O DNA foi extraído e o gene 16S rRNA amplificado utilizando iniciadores universais para domínio Bactéria. Os amplicons foram clonados, transformados em células E. coli e sequenciados. As sequências de nucleotídeos obtidas ( + 500 pares de base por clone) e os respectivos eletroferogramas foram inspecionados utilizando o programa de bioinformática Bionumerics. As sequências geradas foram comparadas ao banco de dados do GenBank empregando-se o algoritmo BLAST. O ponto de corte estabelecido para reconhecer espécies diferentes foi de 2%. Resultados: Todas as amostras foram positivas para o domínio Bacteria. O total de 504 sequências (36+13 sequências/amostra) foi analisado revelando a identificação de 80 filotipos com homologia de 16S rRNA >97% com sequências depositadas no GenBank. A média de taxa por amostra de canal radicular foi de 9,1; com variação de 3-22. Dentre os 80 filotipos identificados, 64% (n=51) são considerados ainda não cultiváveis. Entre os 80 filotipos, 61% (n=49) foram detectados em apenas uma amostra. As espécies/filotipos mais prevalentes foram: Atopobium rimae (5/14 - 35,8%), Tannerella forsythia, Pseudoramibacter alactolyticus  e Dialister clone BS095 (4/12 - 28,6%). Conclusão: Os casos de infecção endodôntica primária investigados demonstram grande diversidade microbiana, caracterizada majoritariamente por microrganismos ainda não cultiváveis. FAPESP (2006/59856-8 e 2007/52492-3).