FOSFOPROTEOMA COMPARATIVO DE MYCOBACTERIUM BOVIS BCG MOREAU

Paloma Rezende Corrêa (IOC/FIOCRUZ); Marcia de Bêrredo Pinho Moreira (IOC/FIOCRUZ); Patricia Melo Ferrão (IOC/FIOCRUZ); Leila Mendonça-lima (IOC/FIOCRUZ)

A tuberculose constitui um grave problema de saúde pública, tendo como única medida preventiva a vacina BCG (bacilo de Calmette-Guérin), apresentando uma eficácia que varia de 0-80%. Devido a este fato, um melhor entendimento da fisiopatologia do bacilo da tuberculose assim como da vacina propriamente dita vem fornecendo dados que estão levando a descoberta e validação de novos alvos terapêuticos assim como de possíveis candidatos para uma vacina mais eficiente. Uma nova classe de alvos promissores vem sendo representada por elementos sinalizadores, como os envolvidos na fosforilação de proteínas. A fosforilação é um processo dinâmico, e os sítios onde este tipo de modificação pós-traducional ocorre nem sempre podem ser previstos a partir da sequência genômica  de um organismo. Por isso, a importância da utilização de técnicas específicas para a visualização desse perfil de proteínas. Em micobactérias estudos recentes começam a desvendar os papéis das proteínas quinases e fosfatases micobacterianas buscando o entendimento de sua atuação na fisiologia e virulência destes organismos. Objetivamos neste estudo, analisar o perfil bidimensional de proteínas fosforiladas de diferentes sub-frações protéicas de Mycobacterium bovis BCG Moreau, cepa vacinal utilizada no Brasil, comparando este padrão de fosforilação com o da cepa de referência, M. bovis BCG Pasteur. Optamos por fazer uma abordagem fosfoproteômica utilizando a técnica de eletroforese 2D aliada a utilização de um corante fluorescente específico para proteínas fosforiladas (ProQ, Molecular Probes). Para isto, utilizamos strips de pH 4-7 (BioRad) seguidos de géis SDS-PAGE  15%. Os resultados obtidos a partir das análises comparativas realizadas com o software PDQuest (BioRad) apontam diferenças qualitativas e quantitativas no perfil de expressão de fosfoproteínas entre as diferentes cepas estudadas. A identificação destes spots diferenciais por espectrometria de massa fornecerá importantes informações sobre o entendimento deste tipo de regulação e sua atuação na fisiologia da vacina BCG.