PRODUÇÃO DE ANTICORPOS MONOCLONAIS PARA O DIAGNÓTICO RÁPIDO DE MALÁRIA

Maria Edilene Martins Almeida (UEA); Luciana Pereira Sousa (ILMD - Fiocruz); Luis André Mariúba (ILMD - Fiocruz); Patrícia Puccinelli Orlandi (ILMD - Fiocruz); Irene Fernandes (Butantã); Paulo Afonso Nogueira (ILMD - Fiocruz)

Introdução: A malária é um dos mais sérios problemas de saúde pública e o diagnóstico mais utilizado continua sendo a microscopia. Contudo a microscopia oferece muitas desvantagens, pois a infecção pode ser facilmente negligenciada como falsos positivos, falsos negativos e principalmente o erro de diagnóstico de espécie mais comum nas infecções mistas. Acrescentando em áreas longínquas e de difícil acesso como nos garimpos, área rural e indígena, as condições de atendimento são inadequados por falta de infra-estrutura laboratorial e profissional capacitado. Diante desta problemática, este trabalho tem como objetivo principal a geração de anticorpos monoclonais contra antígenos considerados marcadores de infecção malárica. Inicialmente estes antígenos, HRP2 do Plasmodium falciparum e LDH do Plasmodium vivax, foram desenvolvidos  como proteínas recombinantes e em seguida camundongos imunizados  cederam células do baço para o desenvolvimento de anticorpos monoclonais visando a produção de um sistema imunocromatografico de fluxo lateral em papel de nitrocelulose para detecção do antígeno nativo no soro de pacientes com malaria. Metodologia: as proteínas LDH vivax e HRP2 foram purificadas e camundongos de 4 semanas responderam com altos títulos de anticorpos contra ambas, células do Baco foram fusionadas com mieloma SP2-0 Ag14.  Resultado: fusão celular com as células do baço do animal imunizado com LDH vivax  deu um total de 21 hibridomas sendo que a grande maioria dos hibridomas reagiu contra a GST e apenas 2 hibridomas  reagiram com LDH recombinante e não com a proteína nativa do P. vivax. Para o desenvolvimento do sistema fluxo lateral, um hibridoma anti HRP2 foi utilizado e o resultado preliminar de acoplamento em ouro coloidal e montagem de um sistema de banda de papel dipstick mostrou a detecção de HRP2 recombinante. Conclusão: estes resultados preliminares mostram o grande potencial do Kit de diagnóstico que este projeto de trabalho vem visando para ser aplicado ao SUS como insumos.