Patricia Machado Bueno Fernandes (UFES); Carolina Dell'santo Vieira Schuwartz (UFES)

A levedura Saccharomyces cerevisiae é um importante modelo celular utilizado para compreender as respostas dos organismos ao estresse. A alta pressão hidrostática (HHP) provoca um forte efeito sobre as estruturas celulares, interferindo na estrutura da membrana, arquitetura celular e em processos de polimerização e desnaturação de proteínas. Estudos de expressão gênica em resposta a HHP revelaram um perfil de resposta ao estresse. Diante disso, neste trabalho, foram empregadas ferramentas da proteômica para fornecer informações sobre as alterações na expressão protéica após tratamento com pressão hidrostática, além de se fazer um estudo de protocolos de extração de proteínas para eletroforese bidimensional (2-DE). S. cerevisiae Y440 foi submetida à pressão hidrostática de 200 MPa por 30 min a temperatura ambiente, e 200 MPa por 30 min a temperatura ambiente seguido de  0,1 MPa por 15 min com aeração a 28º C.  Diferentes protocolos de extração de proteínas como lise por choque térmico, lise por pérolas de vidro com tampão 100 mM Tris-HCl pH 7,0, e lise por pérolas de vidro em células liofilizadas, todos seguidos de sonicação, foram avaliados para assegurar uma alta resolução no 2-DE para análise do perfil proteômico. Por ser necessária uma grande quantidade de células para a extração de proteínas, fez-se uma avaliação da influência da densidade celular frente ao tratamento de pressão de 200 MPa e observou-se que não há diferença significativa na sobrevivência celular. A dosagem de proteínas foi feita pelo método Bradford. A integridade protéica foi monitorada por SDS-PAGE (12%) e observou-se um bom bandeamento e diferentes intensidades de bandas de proteínas após os tratamentos com HHP em comparação com o controle. A primeira dimensão da 2-DE foi feita em gradiente de pH de 3 a 10 e a segunda dimensão em 12% SDS-PAGE. O protocolo de extração escolhido para eletroforese bidimensional foi o de lise com pérolas de vidro em células liofilizadas seguido de sonicação, pois apresentou um bom perfil protéico com spots de proteínas distribuídas em todo o gel.