ENVOLVIMENTO DE METALOPEPTIDASE NO CRESCIMENTO DO FUNGO PHIALOPHORA VERRUCOSA

Marcela Queiroz Granato (FIOCRUZ); Vanila Faber Palmeira (UFRJ); Rosangela Maria de Araújo Soares (UFRJ); Celuta Sales Alviano (UFRJ); André Luis Souza dos Santos (UFRJ); Lucimar Ferreira Kneipp (FIOCRUZ)

Phialophora verrucosa é um dos causadores da cromoblastomicose, uma micose subcutânea crônica, granulomatosa associada à hiperplasia pseudoepiteliomatosa. Recentemente, nosso grupo demonstrou que Fonsecaea pedrosoi, outro agente etiológico da cromoblastomicose, secreta aspártico peptidases, envolvidas no crescimento, diferenciação celular e na patogênese deste fungo. Em estudos prévios demonstramos que P. verrucosa apresenta atividade de metalopeptidase. Neste estudo, nosso objetivo foi investigar o efeito de diferentes inibidores proteolíticos no crescimento de P. verrucosa.  Para os experimentos, conídios foram crescidos em meio Czapek-Dox (CD), pH 5,5, durante 7 dias, obtidos através de filtração em gaze e posterior centrifugação e lavados com salina fisiológica. Em seguida, conídios (10⁶) foram adicionados a microplacas de 96 poços contendo meio CD e diferentes concentrações dos inibidores de metalo- (20-0,001 mM 1,10-fenantrolina e EGTA) e aspártico peptidase (40-0,02 mM pepstatina A e 200-0,1 mM indinavir, saquinavir, lopinavir e nelfinavir). Após incubação a 26^oC durante 7 dias foi adicionado 25 ml de resazurina 0,005% ao meio de crescimento (100 ml) e realizada a leitura. Como resultado observamos que nas condições ensaiadas somente os inibidores de metalopeptidases foram capazes de inibir o crescimento de P. verrucosa. A concentração inibitória mínima determinada foi de 29 mM para 1,10-fenantrolina e 1,25 mM para EGTA. Metalopeptidases em P. verrucosa, como descrito em outros fungos, podem estar envolvidas na aquisição de nutrientes protéicos, bem como na manutenção de processos fisiológicos e metabólicos, como o controle do crescimento celular. Desta forma, inibidores de metalopeptidases representam um novo grupo de agentes antifúngicos com potencial aplicação para o controle dessas infecções.