25º Congresso Brasileiro de Microbiologia
ResumoID:2201-1


Área: Genética e Biologia Molecular ( Divisão N )

ESTUDO DE COMPLEMENTAÇÃO FUNCIONAL DE RAD51 E RAD52 DE SACCHAROMYCES CEREVISIAE POR RADA DE HALOBACTERIUM SALINARUM

Carla Renata Santos (UFMG); Sávio Torres de Farias (UFPA); Mônica Bucciarelli Rodriguez (UFMG)

Resumo

A proteína RadA de arqueia e sua homóloga eucariótica Rad51 são recombinases que atuam no reparo de quebras duplas no DNA por recombinação homóloga e pertencem à família de proteínas Rad51/RecA/RadA. Estas proteínas são importantes na manutenção da estabilidade genômica. Estudos realizados in silico com as proteínas RadA de Halobacterium salinarum e Rad51 de Saccharomyces cerevisiae mostraram grande similaridade estrutural e conservação espacial de resíduos de aminoácidos essenciais para a atividade de Rad51 no sistema de reparo de DNA. Estes resultados sugeriam a possibilidade de complementação funcional em leveduras deficientes em Rad51 pela expressão de RadA. Com o objetivo de testar esta hipótese, os genes radA, RAD51 e RAD52 foram amplificados por reação de PCR utilizando-se iniciadores desenhados a partir de sequências disponíveis no GeneBank e clonados em vetores de expressão em leveduras (pYES2). Leveduras mutantes para os genes rad52 e rad51, bem como selvagens para estes genes, foram transformadas com os plasmídios: pYES, pYES-radA, pYES-RAD51 e pYES-RAD52. Para avaliar a capacidade de complementação funcional in vivo, foram realizados ensaios de sobrevivência das leveduras transformadas ao metilmetanosulfonato (MMS). A capacidade de parte da população das leveduras mutantes rad51, expressando radA de H. salinarum de sobreviver à exposição ao MMS foi um indicativo de que RadA é capaz de complementar parcialmente a função Rad51 no reparo de DNA. A complementação funcional não foi observada em leveduras rad52 expressando radA de H. salinarum. Estes dados indicam que a supressão da mutação de rad51 por radA é específica, uma vez que mesmo sendo super-expresso radA não foi capaz de complementar a mutação em  rad52.


Palavras-chave:  Halobacterium salinarum, radA, rad51, rad52, Saccharomyces cerevisiae