CLONAGENS DOS PROMOTORES OVOALBUMINA E BETACTINA NO VETOR PZSGREEN PARA O DIRECIONAMENTO DA EXPRESSÃO GÊNICA EM GALLUS GALLUS

Evelise Sampaio da Silva (UFPel); Simone Simionatto (UFPel); Vinícius Farias Campos (UFPel); Fabiana K. Seixas (UFPel); João Carlos Deschamps (UFPel); Tiago Collares (UFPel)

O aumento da procura global por proteínas terapêuticas recombinantes leva ao desenvolvimento de alternativas de produção, incluindo a utilização de animais transgênicos como biorreatores. A síntese de proteínas terapêuticas em componentes de ovos de galinhas apresenta vantagens como pouco tempo de incubação dos ovos e alta concentração de proteínas, sendo que a ovoalbumina representa mais da metade dos polipeptídeos totais do ovo. Em técnicas de transgênese animal utiliza-se como controle o gene da betactina, uma proteína expressa em todas as células eucarióticas. Além disso, trabalhos já realizados usando este gene como promotor, demonstraram que o promotor da betactina apresentou melhor desempenho que o promotor do citomegalovírus (CMV). O objetivo deste trabalho foi clonar as sequências promotoras de ovoalbumina e betactina no vetor de expressão em eucarioto pZsGreen (Clontech®). Com o auxílio do programa de VectorNTI foram desenhados primers para amplificação das sequências da ovoalbumina e betactina . Estas, foram amplificadas através da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), clonadas no vetor pZsGreen e utilizadas para transformar Escherichia coli TOP10. Os clones recombinantes foram selecionados, caracterizados por enzimas de restrição e submetidos ao seqüenciamento de DNA. O resultado da digestão enzimática e do seqüenciamento de DNA comprovaram a identidade dos plasmídios recombinantes  pZsGreen/Ovoalbumina e pZsGreen/Betactina. Estes vetores recombinantes estão sendo utilizados em um ensaio de expressão gênica in vitro em cultura de células para comprovar a funcionalidade destas construções em células eucarióticas. Posteriormente a expressão será testada in vivo em Gallus gallus. Espera-se que os vetores recombinantes pZsGreen/Ovoalbumina e pZsGreen/Betactina otimizem o direcionamento da expressão de genes de interesse em Gallus gallus e dessa forma, possam ser utilizados na produção de biofármacos em modelos animais.