ANÁLISE COMPARATIVA DOS SECRETOMAS DE LINHAGENS DE CORYNEBACTERIUM PSEUDOTUBERCULOSIS ISOLADAS DE PEQUENOS RUMINANTES

Wanderson Marques Silva (UFMG); Núbia Seyffert (UFMG); Leonardo Mendes Castro Alves (UFMG); Luis Gustavo Carvalho Pacheco (UFMG); Fernanda Alves Dorella (UFMG); Thiago Luiz de Paula Castro (UFMG); Luiz Carlos Guimarães (UFPA); Artur Silva (UFPA); Anderson Miyoshi (UFMG); Vasco Azevedo (UFMG)

Corynebacterium pseudotuberculosis (CP) é o agente etiológico da linfadenite caseosa (LC), que acomete caprinos e ovinos em todo o mundo, gerando perdas econômicas significativas relacionadas à depreciação de peles, carcaças e redução da produção de leite devido às lesões granulomatosas causadas pela enfermidade. Proteínas secretadas são conhecidas como mediadores importantes na interação patógeno-hospedeiro, sendo os estudos proteômicos de extrema importância para a compreensão dos mecanismos moleculares e bioquímicos que culminam com a instalação e progressão da doença. A análise comparativa entre linhagens possibilita a identificação de diversas proteínas ligadas a estes mecanismos. Nesse contexto, estamos analisando as diferentes proteínas secretadas nas duas linhagens de CP isoladas de caprinos e ovinos. As bactérias foram crescidas em meio quimicamente definido a 37ºC por 72h, e posteriormente, foi utilizada a técnica Three-phase partitioning para obter as proteínas secretadas, que foram quantificadas pelo método de Bradford. Um gel de poliacrilamida (SDS-PAGE) 12% foi feito para avaliar o perfil protéico das proteínas secretadas e após uma eletroforese bidimensional (2-DE) utilizando tiras de gel com pH imobilizado de 3a10NL para avaliar os diferentes spots. Os géis foram analisados pelo programa Image Master 2D Platinum 7.0. A análise em SDS-PAGE, demonstrou a presença de componentes protéicos com pesos moleculares entre 14 e 94 kDa. O perfil eletroforético observado em 2-DE demonstrou spots com pesos moleculares entre 14 e 97 kDa e uma maior concentração na faixa de pI 3 a 5.6 em ambas as bactérias. A análise comparativa dos géis demonstrou 70 spots exclusivos para a linhagem isolada de caprinos, 50 spots exclusivos para a linhagem isolada de ovinos e 103 spots comuns entre as linhagens. As análises proteômicas dos secretomas de diferentes linhagens de CP podem resultar não somente na identificação de novos determinantes de virulência, potenciais candidatos para o desenvolvimento de vacinas contra a LC, mas também de biomarcadores para o diagnóstico da enfermidade causada por esse patógeno.