QUORUM SENSING EM ESCHERICHIA COLI ENTEROPATOGÊNICA ATÍPICA (EPEC ATÍPICA)

Franciely Paula Toniolo de Paiva (Instituto Butantan); Thiago Oliveira dos Santos (Instituto Butantan); Marcelo Palma Sircili (Instituto Butantan)

"Quorum sensing" é o termo utilizado para designar um mecanismo de regulação gênica dependente da concentração celular. Esse mecanismo é usado por bactérias Gram-positivas e Gram-negativas e em ambos os casos envolve a produção e detecção de moléculas sinalizadoras, denominadas autoindutores. Até o momento, quatro sistemas de quorum sensing foram descritos: dois destes sistemas, os quais utilizam autoindutor-1 (AI-1) e autoindutor-3 (AI-3), são encontrados em bactérias Gram-negativas, enquanto bactérias Gram-positivas utilizam um sistema de autoindução polipeptídico (AIP). O quarto sistema utiliza autoindutor-2 (AI-2) e é encontrado em bactérias Gram-positivas e Gram-negativas. Diversos mecanismos celulares, dentre eles a expressão de fatores de virulência em amostras de E. coli enteropatogênica (EPEC) e E. coli enterohemorrágica (EHEC), são regulados por este fenômeno. O presente estudo verificou a possibilidade de comunicação in vitro entre amostras de EPEC atípica e E. coli comensal. Para obtenção de meio pré-condicionado as amostras foram cultivadas a 37ºC com agitação de 250rpm em meio LB 0,4M de NaCl até atingir DO₆₀₀ de 1,0. O crescimento foi centrifugado e o sobrenadante filtrado em membrana de 0,22um. No ensaio de Bgalactosidase a amostra reporter contendo a fusão LEE1::lacZ foi inoculada nestes meios pré-condicionados até atingir DO₆₀₀ menor ou igual a 0,2 e a atividade de Bgalactosidase foi medida em Unidades de Miller. Nos ensaios de adesão as amostras bacterianas foram cultivadas por aproximadamente 18 horas em meio LB a 37ºC. Após, foram adicionadas às células HEp-2 e incubadas por 6 horas a 37ºC com 5% de CO₂, lavadas com PBS, fixadas com metanol e coradas com Giemsa. Através dos resultados foi possível verificar a produção de AI-3 nas amostras testadas e quantificar sua capacidade de indução. Aparentemente, a inoculação de E. coli comensal com culturas de células  influencia a resposta celular de EPEC.

Suporte financeiro: FAPESP