PESQUISA DE GENES CDTA E CDTB EM CEPAS TOXIGÊNICAS DE CLOSTRIDIUM DIFFICILE ISOLADAS DE PACIENTES E DO AMBIENTE DE HOSPITAL PEDIÁTRICO DA CIDADE DO RIO DE JANEIRO

Rosane Ferro Trindade (UEZO); Letícia Oliveira da Cruz (UEZO); Joaquim dos Santos-filho (UFRJ); Ilana Teruszkin Balassiano (UFRJ); Jessica M. B. D. Vieira (UEZO); Eliane de Oliveira Ferreira (UFRJ); Regina Maria Cavalcanti Pilotto Domingues (UFRJ)

Clostridium difficile é uma espécie anaeróbia constituída por bacilos Gram-positivos formadores de endosporos. Estes microrganismos têm sido relacionados a casos de diarréia associada a antibióticos (DAA) e colite pseudomembranosa (CPM). Dentre os inúmeros fatores de virulência associados a essa espécie bacteriana, destacam-se as toxinas A (enterotoxina) e B (citotoxina). Além destas, algumas cepas de C. difficile são capazes de produzir também a toxina binária CDT (ADP-ribosiltransferase), cujo papel no processo infeccioso permanece incerto. CDT é uma toxina do tipo AB, e sua expressão está associada aos genes cdtA e cdtB que codificam duas subunidades independentes, CDTa (componente enzimático) e CDTb (componente de ligação). Nos últimos anos o aumento do número de surtos de DAA e CPM, em diversos países, relacionam-se à rápida disseminação de uma cepa hipervirulenta de C.difficile, caracterizada por Pulsed Field Gel Electrophoresis e denominada NAP1. Essa cepa apresenta como principais características: deleção no gene que regula negativamente a expressão das toxinas A e B, resultando na sua superexpressão, produção de CDT e elevados níveis de resistência a antimicrobianos. Em estudo anterior, nosso grupo isolou e caracterizou 21 cepas de C. difficile a partir de fezes de pacientes sintomáticos e assintomáticos com relação à DAA, e do ambiente do Instituto de Puericultura e Pediatria Martagão Gesteira (IPPMG/UFRJ). Estas cepas foram consideradas toxigênicas por apresentarem amplificações correspondentes aos genes tcdA e tcdB quando foi utilizada a técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR). Dessa forma, o objetivo do presente trabalho é avaliar a presença dos genes cdtA e cdtB nestas cepas, utilizando-se a técnica de PCR. Das 21 cepas analisadas, 15 apresentaram reação negativa para a amplificação de ambos os genes. As outras seis, porém, apresentaram reação positiva apenas para a amplificação de cdtB. Para confirmar a fidelidade deste gene, os amplicons estão sendo sequenciados. Posteriormente, o gene cdtA destes seis isolados positivos para cdtB será investigado, para se esclarecer se o gene está ausente ou se apresenta deleções em sua sequência. Para tanto, serão desenhados novos iniciadores que permitam a amplificação da seqüência completa de cdtA, e os amplicons obtidos serão sequenciados e comparados com sequências gênicas de C. difficile previamente depositadas em bancos de dados. O presente estudo contribui para o esclarecimento de características genotípicas de cepas de C. difficile isoladas de pacientes e do ambiente de uma unidade hospitalar da cidade do Rio de Janeiro.