PRODUÇÃO, EXTRAÇÃO, E PURIFICAÇÃO DE EXOPOLISSACARÍDEOS DA LINHAGEM DE LEUCONOSTOCO MESENTEROIDES R2

Elinalva Marciel Paulo Paulo (UEFS); Murilo Pinho Vasconcelos Vasconcelos (UEFS); Ivelise Santiago Oliveira Oliveira (UEFS); Sandra Assis Assis (UEFS); Rosely dos Santos Nascimento Nascimento (EMBRAPA); Itamar Soares de Melo Melo (EMBRAPA); Milton Ricardo de Abreu Roque Roque (UFBA)

Diferentes etapas são utilizadas para a obtenção dos exopolissacarideos (EPSs) produzidos nos cultivos microbianos, os quais envolvem a combinação de técnicas de extração, purificação e quantificação. Basicamente o processo de recuperação primária dos exopolissacarídeos envolve remoção de células microbianas, precipitação do biopólímero, secagem e moagem. As células são removidas pelo processo da centrifugação. Os EPSs podem ser recuperados de forma impura, secando diretamente o extrato viscoso ou podem passar por uma purificação inicial, utilizando técnicas como a formação de uma insolubilização do polímero com a adição de certos sais ou modificação do pH . Podem também ser recuperados pelo processo da precipitação após tratamentos com solventes orgânicos solúveis em água. Os mais utilizados são o álcool etílico, acetona, metanol e isopropanol. Este trabalho teve como objetivo produzir e purificar exopolissacarídeos da linhagem de Leuconostoc mesenteroides R2. Foram inoculadas alíquotas de 1% da cultura ativa da linhagem de L. mesenteroides R2, com densidade ótica 1,92 ± 0,01 abs a 600nm da bactéria lática selecionada, no erlenmeyer contendo meio base suplementado com 8,1% de sacarose, pH 8,0 e incubados a 28º C. Após o período de  incubação, a cultura foi tratada com ácido tricloroácetico 10%,  homogeneizada por 30 minutos no agitador orbital a 90rpm, centrifugada a 8150 x g  por 20 minutos. O material sedimentado foi descartado e foi adicionado ao sobrenadante álcool absoluto 1:2, sendo imediatamente acondicionado a 4º C por 24h..  Foram obtidos precipitados de  duas frações de EPS . Estas foram separadas através de filtração em tecido de voal com mesh de 500μm. sendo purificadas através de três lavagens sucessivas em água, seguida pela reprecipitação em álcool absoluto e submetidas à diálise fechada contra água destilada em membranas com limite de exclusão de 15 kDa.  As frações do polímero foram secas em estufa a 40º C ± 2º até peso constante, trituradas visualizadas no microscópio eletrônico, apresentando uma fração com aspecto compacto, não poroso e a outra fração  como uma lâmina quebradiça.