USO DE SPOLIGOTYPING PARA GENOTIPAGEM DO MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS OBTIDOS DE LÂMINAS CORADAS PELO MÉTODO DE ZIEHL-NEELSEN.

Ismari Perini Furlaneto (UFPA); Emilyn Costa Conceição (IEC); Michele Lima de Brito Brito (LACEN-PA); Zelinda Habib Dantas de Santana (LACEN-PA); Ana Roberta Fusco da Costa (IEC); Harrison Magdinier Gomes (Fiocruz); Maria Luíza Lopes (IEC); Karla Valéria Batista Lima (IEC)

Introdução: A tuberculose é uma doença contagiosa com características sociais e demográficas causada por bacilos pertencentes ao Complexo Mycobacterium tuberculosis (CMTB). A genotipagem por Spoligotyping é útil por ser rápida e simultaneamente identificar e diferenciar membros do CMTB diretamente de amostras clínicas, fornecendo informações epidemiológicas sobre as famílias de M. tuberculosis (Mtb) identificadas em determinada região. Foi utilizado DNA extraído de lâminas positivas para BAAR, confeccionadas entre 10/2007 e 03/2008, pertencentes a pacientes residentes em Ananindeua, Pará, região Norte do Brasil. Materiais e Métodos: Submetemos ao estudo 65 lâminas (62 lâminas BAAR + e 3 lâminas novas) e utilizamos como controle DNA de Mtb H37Rv e M. bovis. A extração do DNA compreendeu etapas de lise química, precipitação de proteínas e purificação do DNA. O Spoligotyping foi executado conforme descrito previamente, com adaptações. Os perfis obtidos foram comparados com os do Banco Internacional de Spoligotipos (SpolDB4). Resultados e Discussão: Entre as 62 lâminas positivas, 52 (83,9%) apresentaram padrão de Spoligotyping considerados completo e 10 (16,1%) incompletos; as lâminas novas não mostraram sinal de hibridação. De acordo com o SpolDB4, 45 perfis foram identificados e resultaram em 28 padrões, sendo 21 padrões únicos e 7 compartilhados por 24 amostras. Foram identificadas 7 famílias: 21 (46,7%) amostras pertenciam à família LAM, 10 (22,2%) à família T, 5 (11,1%) à família Haarlen (H). As famílias X, EAI e MANU tiveram 2 (4,4%), 2 (4,4%) e 1 (2,2%) amostras, respectivamente. O perfil 129 encontrado, pertencente à família EAI, só foi relatado em nossa Região. Os perfis mais frequentes foram o 53 (5 amostras), pertencente à família T1, seguido pelos perfis 42 (LAM9) e 64 (LAM6), com 5 e 3 amostras, respectivamente. Dentre os outros perfis encontrados neste estudo, os perfis 740 (H3), 1691 (LAM2) e 1709 (LAM5-LAM8) ainda não foram descritos no Brasil e não há registro dos perfis 240, 397, 402 (U), 150, 1671 e 1894 (LAM9), 86 e 291 (T1), 75 (H3) e 1690 (MANU2) em nossa Região. Conclusão: É possível extrair e tipar Mtb a partir de lâminas, sendo um método de baixo custo, que evita a manipulação e exposição às cepas cultivadas, além de ser útil em fornecer rapidamente dados geoepidemiológicos.