ANÁLISE DO SÍTIO DE INÍCIO DE TRANSCRIÇÃO DE GENES DE MYCOPLASMA HYOPNEUMONIAE: CARACTERIZAÇÃO DE PROMOTORES

Shana de Souto Weber (UFRGS); Irene Silveira Schrank (UFRGS)

Mycoplasma hyopneumoniae (MH) é uma das menores bactérias encontradas na natureza, apresentando genoma altamente reduzido e ausência de parede celular. Este organismo é o agente causador da pneumonia enzoótica suína, a qual apresenta distribuição mundial causando importantes perdas econômicas. Na última década, várias espécies de Mycoplasma tiveram seus genomas completamente seqüenciados, incluindo três cepas de MH. Apesar da grande quantidade de dados gerados, pouco se sabe sobre as seqüências nucleotídicas que controlam o início da transcrição nestes microrganismos. A grande variabilidade encontrada nas regiões promotoras, o baixo conteúdo de GC presente no genoma e a carência de promotores experimentalmente caracterizados, são fatores que dificultam o reconhecimento in silico das seqüências reguladoras no gênero Mycoplasma. Sendo assim, este trabalho pretende definir, através da técnica de RLM-RACE (RNA Ligase Mediated Rapid Amplification of cDNA Ends), o sítio de início de transcrição de alguns genes de M. hyopneumoniae, possibilitando, dessa forma, a análise das regiões localizadas a 5’ e 3’. Inicialmente, estão sendo analisados os transcritos de genes que codificam proteínas antigênicas e proteínas ribossomais. Também serão examinados o sítio de início de transcrição de diversos operons. A partir da utilização de primers específicos e de RNA total extraído de MH linhagem 7448, cultivado a 37°C em meio padrão Friis, foram feitos experimentos de RT-PCR e RLM-RACE.  Até o momento, seis genes tiveram a transcrição confirmada por RT-PCR; destes, cinco tiveram o seu sítio +1 determinado. Resultados preliminares mostram que os sítios de início de transcrição encontrados localizam-se entre 28 a 69 pares de base de distância do códon de início de tradução, havendo preferência por adeninas e guaninas. Além disso, nos dois genes verificados até o momento, foram observadas possíveis seqüências promotoras na região -10, enquanto uma provável região -35 foi localizada em apenas um deles. A análise das regiões adjacentes ao +1 dos demais genes está sendo realizada na tentativa de caracterizar os elementos promotores.