DIFERENCIAÇÃO DE CEPAS DE FUNGOS DERMATÓFITOS POR ANÁLISE  DE RFLP-PCR DE REGIÃO INTERGÊNICA DO DNA RIBOSSOMAL.

Maria Zeli Moreira Frota Frota (FCF/UFAM); João Vicente Braga de Souza Souza (INPA); Aya Sadahiro Sadahiro (ICB/UFAM)

As dermatofitoses são infecções de elevada prevalência, causadas por um grupo de fungos queratinofílicos, os dermatófitos, e estão entre as mais comuns das infecções humanas, especialmente em regiões de clima tropical. Dentre os dermatófitos mais isolados em adultos, destacam-se os antropofílicos pertencentes aos gêneros Trichophyton e Epidermophyton. Estas espécies produzem principalmente infecções do tipo crônico, com lesões persistentes e recidivantes, como nos casos das onicomicoses, tinea pedis e tinea cruris. Os métodos convencionais para a diferenciação destes fungos são laboriosos e nem sempre permitem uma boa sensibilidade e especifidade, especialmente diante das semelhanças e/ou pleomorfismos observados nas colônias. O objetivo deste trabalho foi identificar e diferenciar espécies de dermatófitos por PCR e RFLP. Produtos de PCR gerados pelo par de primers ITS5 e NL4 foram avaliados e digeridos com diferentes enzimas de restrição (Bfal, HaeIII e Ddel) e, os perfis de RFLP analisados por eletroforese. Cepas de T.rubrum, T.mentagrophytes e E.floccosum foram isoladas de pacientes com dermatofitoses e uma cepa de C. albicans foi utilizada como controle. A extração de DNA foi realizada utilizando-se o sistema comercial de extração DNeasy Blood & Tissue Kit (QIAGEN Group DU-Beckman Instruments,Inc). A digestão dos produtos de PCR foi realizada individualmente com 10U des enzimas de restrição por 12h à 37^oC. Foram gerados produtos de PCR de 1100pb para todos os fungos avaliados, exceto para E.floccosum que gerou um produto de 1200pb. Perfis distintos de RFLP foram produzidos para cada espécie testada com as três enzimas de restrição, no entanto, as enzimas Ddel e HaeIII geraram 04 bandas por microrganismo e perfis com melhor distinção. Para a continuação deste trabalho será utilizada a enzima Ddel que gerou os seguintes perfís: 300, 250, 125 e 75pb (T.rubrum); 600, 300, 125 e 75pb (T.mentagrophytes); 650, 300, 125 e 75pb (E. floccosum); 450, 350, 200 e 150pb (C. albicans).