| Área: Genética e Biologia Molecular ( Divisão N ) ESTUDO DE UM CLUSTER GENÉTICO DE CAULOBACTER CRESCENTUS ENVOLVIDO NA RESPOSTA A ESTRESSE POR CÁTIONS DIVALENTES Estela Ynés Valencia Morante (PPIB); Vania Braz (ICB); Marilis Del Valle Marques (ICB)
Resumo
Caulobacter crescentus é uma alfaproteobactéria oligotrófica de vida livre exposta a variações nas concentrações dos compostos no ambiente. A varredura de uma biblioteca de mutantes construída pela inserção aleatória do transposon mini-Tn5K2lacZ foram isolados dois mutantes sensíveis a Cd2+ e Zn2+, mutados nos genes CC1636 e CC1640. Este trabalho tem por objetivo avaliar o papel do cluster de genes CC1634 a CC1640 de Caulobacter crescentus na resposta a metais. Os genes CC1635, CC1636, CC1637 codificam proteínas hipotéticas conservadas, os genes CC1634 e CC1638 duas prováveis oxidoredutases com domínio GMC, o gene CC1640 um regulador de transcrição e o gene CC1639 codifica uma proteína transmembrana com um domínio sensor extracitoplasmático e um domínio peptidase citoplasmático que pertence a classe das metaloproteases (HEXXH) que ligam Zn2+.
Os promotores dos genes CC1634, CC1636, CC1638 e CC1640 foram clonados a montante do gene repórter lacZ com a finalidade de determinar em quais condições estes genes apresentavam-se mais expressos. Os ensaios de atividade de B-Galactosidase indicaram que o gene CC1638 não possui promotor próprio, embora sua região codificadora encontre-se a uma distäncia de 174 pb do operon contendo os genes CC1639 e CC1640. Ensaios de RT-PCR confirmaram que os genes CC1637, CC1638, C1639 e CC1640 encontram-se num único transcrito constituindo, portanto, um operon. De maneira similar, os genes CC1634 e CC1635 foram testados através de RT-PCR e mostraram-se co-transcritos, enquanto que o transcrito de CC1636 é monocistrônico. Ensaios de atividade de B-Galactosidase indicaram que a expressão dos operons é aumentada na presença de ditiotreitol, mas não de H2O2. Além disso, o operon CC1634-35 mostra-se mais expresso na presença de cádmio (CdCl2) e reprimido na presença de cobre (CuCl2). A região codificando o domínio endometalopeptidase do gene CC1639 foi clonada no vetor de expressão pProEXHta e introduzida em E. coli DH5a. O peptídio foi purificado a partir de corpos de inclusão para posteriores ensaios de proteólise in vitro do putativo repressor CC1640.
Apoio Financeiro: CNPq e FAPESP
Palavras-chave: Caulobacter crescentus, Expressão gênica, Estresse a metais |