25º Congresso Brasileiro de Microbiologia
ResumoID:2051-1


Área: Microbiologia Veterinária ( Divisão G )

PRODUÇÃO E CARACTERIZAÇÃO DE UMA PROTEÍNA SECRETADA EXCLUSIVA DE CORYNEBACTERIUM PSEUDOTUBERCULOSIS PARA O DIAGNÓSTICO DA LINFADENITE CASEOSA

Leonardo Mendes Castro Alves (UFMG); Núbia Seyffert (UFMG); Tessália Diniz Luerce Saraiva (UFMG); Priscila Grynberg (UFMG); Wanderson Marques da Silva (UFMG); Luis Gustavo Carvalho Pacheco (UFMG); Fernanda Alves Dorella (UFMG); Roberto José Meyer Nascimento (UFBA); Anderson Miyoshi (UFMG); Vasco Azevedo (UFMG)

Resumo

Linfadenite caseosa (LC) é uma doença infecto-contagiosa crônica que acomete pequenos ruminantes. A enfermidade é caracterizada pela formação de abscessos superficiais ou viscerais, e está associada a grandes prejuízos na ovinocaprinocultura, pela perda de peso, deficiência reprodutiva e redução na produção de lã dos animais infectados. Corynebacterium pseudotuberculosis (CP), seu agente etiológico, têm sido alvo de intensos estudos para o desenvolvimento de um método diagnóstico rápido, preciso e com baixo custo. Neste trabalho descrevemos a produção heteróloga da proteína da Cpsec39 em Escherichia coli. A Cpsec39 foi predita como exportada e, como exclusiva de CP, pode representar um alvo interessante para o desenvolvimento de um teste diagnóstico acurado. Para a caracterização in silico foram utilizados os programas: Glimmer, para determinação da ORF; blastn, blastx e blastp contra o banco de dados não-reduntantes do GenBank para a realização das análises de similaridades; InterProScan, para as buscas por domínios conservados e os programas TMHMM 2.0 e SignalP 3.0  para identificação do peptídeo sinal e domínio transmembrânico. Para a clonagem da cpsec39 utilizou-se o vetor pSMART pertecente ao Kit  Softag™ Protein Expression & Purification System. O nível de expressão foi avaliado em quatro diferentes linhagens OverExpress™ (C41/DE3 pLysS, C41/DE3, C43/DE3, C43/DE3 pLysS), dentre as quais foi observada uma maior produção da proteína na OverExpress™ C41/DE3 pLysS. A purificação da rCpsec39 foi realizada por eletroeluição. A rCpsec39 está sendo submetida a testes imunológicos e moleculares para a posterior seleção do método diagnóstico a ser empregado para a elaboração de um ensaio sensível e específico para a detecção da LC. Até o momento, os resultados demonstram a importância dessa proteína na elaboração de um teste diagnóstico para LC em pequenos ruminantes, que poderá contribuir para o controle da doença na caprinovinocultura nacional.

APOIO FINANCEIRO: CNPq, CAPES e FAPEMIG





Palavras-chave:  Corynebacterium pseudotuberculosis, Linfadenite caseosa, rCpsec39, Diagnóstico