Introdução: As Infecções do Trato Urinário (ITU), depois das respiratórias, são as infecções mais detectadas e tratadas em nível mundial. Os agentes microbiológicos responsáveis pela ITU expressam e adquirem resistência aos antimicrobianos, sendo essa a sua principal desvantagem com relação à antibioticoterapia. Dessa forma, cada vez mais os antibióticos convencionais tornando-se menos eficazes no tratamento de infecções.  Por serem frequentes os casos de ITU e sua ação danosa à saúde humana, o presente estudo visou traçar um perfil de pacientes com ITU, atendidos no Hospital e Maternidade Metropolitano, situado em São Paulo, assim como os principais agentes causadores e suas resistências. Metodologia: Análise de 160 resultados de exames de uroculturas positivas com respectivo antibiograma, de 159 pacientes pertencentes a todas as faixas etárias, no período de janeiro à junho de 2009. Procedeu-se a inoculação da urina em laminocultivo e realização do antibiograma. Os dados foram mensurados para verificar sua significância. Discussão e Conclusão: Dos exames analisados, 77,98% eram de indivíduos do sexo feminino e 22,01% de indivíduos do sexo masculino, corroborando com pesquisas realizadas sobre este assunto. Em ambos os sexos, a maior incidência de ITU foi em indivíduos na faixa etária entre 0 a 12 anos (47,79%). Entre as bactérias isoladas, predominaram a Escherichia coli (58,8%) e Klebsiela pneumonie (8,13%), seguidas da Proteus vulgaris e Proteus mirabillis, correspondendo a 5,64% dos casos cada uma. Dentre os grupos de bactérias, os cocos Gram-positivos representaram 3,75%. Os bacilos Gram-negativos não fermentadores de glicose corresponderam a 1,88% e as enterobactérias a 94,37%. Foram testados 28 antimicrobianos,  as bactérias apresentaram maior resistência a: Ampicilina, Tetraciclina, Trimetropim/ Sulfa., Cefalotina e Nitrofurantoína. Conclui-se que os indivíduos do sexo feminino são os mais acometidos pela a ITU. Pacientes pediátricos estão entre a população mais susceptível à infecção. As enterobactérias são as principais responsáveis pela ITU. Determinados antibióticos já não são mais eficientes ao tratamento de ITU, fazendo-se necessário desestimular seu uso indiscriminado.